SETD8基因表达对乳腺癌细胞周期、活性氧及药物敏感性的影响

发布时间：2021-09-01 09:32

　　目的:构建SETD8重组慢病毒载体,探讨SETD8对人乳腺癌细胞周期、氧化应激的影响,并观察稳定敲低SETD8后对乳腺癌细胞多西他赛敏感性的影响。方法:构建含SETD8基因的重组慢病毒载体,经转染,荧光显微镜观察感染效率;采用RT-qPCR和Western blot检测SETD8 m RNA和蛋白相对表达量;采用流式细胞技术检测细胞周期及活性氧水平,通过CCK-8试剂检测稳定敲低SETD8基因的乳腺癌细胞对多西他赛的敏感性变化。结果:成功包装慢病毒,荧光观察慢病毒感染效率在85%左右,通过PCR和WB验证SETD8过表达及敲低稳转细胞系的效率显著（P<0.01）。低表达SETD8的乳腺癌细胞周期停滞在G2/M和S期,细胞内ROS水平高于对照组。不同浓度多西他赛处理的SETD8敲低稳转细胞系的细胞活性较对照组明显降低（P<0.01）。结论:慢病毒介导下调SETD8表达,使得乳腺癌细胞周期阻滞在G2/M期,细胞内ROS增多,与多西他赛发生协同作用,从而增加了药物敏感性。 

【文章来源】：现代生物医学进展. 2020,20(12)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

慢病毒转染使SETD8在MDA-MB-231细胞静默，如图是转染72H后荧光密度观察（A为MDA-MB-231阴性对照稳转株，BC为MDA-MB-231敲低shSETD8稳转株）

绝大多数乳腺癌患者死于肿瘤的复发转移，研究表明因肿瘤复发转移死亡的患者中有90%的人发生耐药[8]。耐药的发生机制包括：肿瘤细胞的EMT特性，肿瘤干细胞的免疫逃逸作用，肿瘤代谢重编程，DNA损伤修复能力强等[9,10]。因此，增强肿瘤细胞对多西他赛的敏感性，提高疗效成为提高乳腺癌患者生存率的重要途径。图3 SETD8能够参与调控乳腺癌细胞周期进程A-B:shSETD8转染231细胞后细胞周期比例变化与control组比较；C-D:SETD8转染MCF-7细胞后细胞周期比例变化与阴性对照组比较。*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.

图2 AC通过RT-qPCR进行SETD8敲低和过表达mRNA效果检测；BD通过Western blot进行慢病毒敲减和过表达SETD8蛋白效果检测图4 SETD8对乳腺癌细胞内活性氧水平的影响


本文编号：3376741