新发禽流感病毒HA/NA基因UTR可变区突变影响病毒生物学特性的分子机制研究

发布时间：2021-09-01 10:00

　　目的:流感病毒基因组UTR可变区的碱基多态性可影响其基因的转录、复制和翻译,从而影响病毒的生物学特性。本研究利用本课题组前期自主构建的RNA聚合酶I EGFP荧光报告系统,即新发禽流感病毒H5N6/H7N9/H9N2的HA/NA-3’UTR-EGFP-5’UTR随机突变库。从其中随机挑选各亚型的突变克隆,定性及定量分析EGFP基因的表达情况。测序鉴定EGFP报告基因上调的HA/NA-UTR突变克隆并分析导致EGFP表达上调的UTR可变区特异SNP特征。同时利用自主构建的双向反向遗传学体系包装H9N2流感病毒和UTR区突变病毒,测定并比较其病毒感染力,从而探讨流感病毒UTR区的基因突变对病毒感染能力变化的影响。方法:1.从随机突变库中筛选EGFP表达上调株:采用实验室构建的由HA/NA-UTR随机突变RNA聚合酶I荧光报告系统（HA/NA-3’UTR-EGFP-5’UTR）组成的突变库,从HA/NA-UTR随机突变库的H5/H7/H9和N2/N6/N9亚型中分别随机挑选突变克隆,将突变克隆转染至由H1N1染毒的MDCK细胞,通过荧光显微镜观察EGFP基因的荧光表达情况,利用多功能酶标仪测... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

甲型流感病毒结构示意图

暨南大学硕士学位论文4出以供细胞质核糖体翻译[23]。甲型流感病毒的蛋白质合成完全依赖于宿主细胞的翻译机制。一旦合成病毒RNA，它们就会通过核孔进入宿主细胞的细胞质。核出口之后，病毒mRNA的翻译分为细胞质核糖体（PB1、PB2、PA、NP、NS1、NS2和M1）和内质网相关的核糖体（膜蛋白HA、NA和M2）[24]。新合成的NP蛋白和聚合酶亚基（PB1、PB2和PA）上的核定位序列将这些蛋白质导向至细胞核。NP和PB2蛋白是单独导入的，而PB1和PA蛋白是作为异二聚体导入的[25,26]。在宿主细胞的细胞质中，vRNP被基质蛋白M1包围，被导向定位于细胞质膜的出芽位点，用于病毒的组装[27,28]。HA、NA和M2穿过反式高尔基体网络后，翻译过程在内质网中进行。病毒被携带HA、NA和离子通道蛋白M2的宿主细胞衍生的脂质膜包裹，这些蛋白质被运输到细胞的顶端表面以从极化细胞中排出[29]。新组装的病毒通过破坏SA以出芽的方式释放出来，其依赖于NA的唾液酸酶活性。图2.甲型流感病毒在宿主细胞中的生活史Figure2.SchematicdiagramoflifecycleofinfluenzaAvirusinthehostcell.

暨南大学硕士学位论文23图3荧光显微镜下H5-UTR突变克隆的绿色荧光蛋白表达情况Fig.3TheexpressionofH5-UTRmutantclonesonEGFPusingFluorescencemicroscopy图4荧光显微镜下H7-UTR突变克隆的绿色荧光蛋白表达情况Fig.4TheexpressionofH7-UTRmutantclonesonEGFPusingFluorescencemicroscopy图5荧光显微镜下H9-UTR突变克隆的绿色荧光蛋白表达情况Fig.5TheexpressionofH9-UTRmutantclonesonEGFPusingFluorescencemicroscopy

【参考文献】：
硕士论文
[1]甲型流感H5/H7/H9及N2/N6/N9亚型非翻译区随机突变基因库构建及筛选[D]. 陈燕慈.暨南大学 2018



本文编号：3376778