大鲵蛙病毒感染大鲵的组织嗜性、病理损伤及对MHC类基因表达量影响的研究

发布时间：2017-05-03 05:08

  本文关键词：大鲵蛙病毒感染大鲵的组织嗜性、病理损伤及对MHC类基因表达量影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为研究大鲵蛙病毒(CGSRV)感染大鲵的组织嗜性、动态病理损伤及对MHC基因表达量的影响,以1.0×106.5TCID50ml-1浓度的CGSRV腹腔注射感染大鲵(体重280.3±20.2g,体长33.9±2.3cm),在感染的Od、3d、5d、7d、9d、13d、16d随机剖杀3尾,采取肝、肾、脾、肺、肠、皮肤肌肉、脑、心和胃等组织,石蜡切片和HE染色对CGSRV感染大鲵的病理损伤过程进行观察,qPCR技术对病毒的组织嗜性及动态定量分布进行研究。结果显示感染大鲵的临床特征为体表黏液分泌增多,食欲下降甚至废绝,四肢与头部肿胀,皮肤肌肉出血、溃烂等。剖检发现,感染后3d肝、脾、肾肿大；7-9d出现腹水,胃肠道空虚,肺出血,脾局灶性坏死：13--16d肝肿大、淤血,呈花斑状,脾多灶性坏死,肾肿大、点状出血,胃肠道内充满淡黄色粘稠物。病理组织学上,CGSRV感染导致大鲵多组织、器官损伤,其中肝、脾、肾和皮肤肌肉病变严重,为损伤靶器官,且在一些损伤的细胞内见嗜碱性或嗜酸性包涵体。感染后3d肝细胞与肾小管上皮细胞变性,肾间以及肝小叶中央静脉周围淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润；5-7d实质性器官变性、坏死、炎症加重,胃肠道呈卡他性炎。9d表皮细胞坏死、脱落,肌纤维变性、坏死。13-16d肝广泛变性、坏死与炎症,脾淋巴细胞数量显著减少,肾小球渗出性-坏死性炎,皮肤肌肉呈出血性-坏死性炎和实质性心肌炎。SYBRGreen qPCR结果显示,整个感染进程中各组织CGSRV含量呈上升趋势,不同组织病毒量在789×102-4.61×108copies/ug DNA之间,其中肺、肠、肝、脾、肾和皮肤肌肉含量高,表明CGSRV具有广泛的组织嗜性,但肝、脾、肾、皮肤肌肉为其复制和损伤的靶器官,且病毒分布量与病理损伤呈正相关。采用qPCR技术在CGSRV感染大鲵的0d、3d、5d、7d、9d、13d、16d对大鲵肝、脾、肾、肠、胃、皮肤、肺、肌肉等组织、器官中MHCI和MHCII类基因的表达影响进行了研究。结果显示,CGSRV感染能引起所有被检组织中MHC I、IIA和ⅡB基因表达变化,其中MHCI和MHCIIA基因表达量高,与Od表达量差异显著,MHCIIB基因表达量变化较小,但上述3种MHC基因都呈先上升后降低趋势,具有时间依赖性和组织差异性。感染后3d,肝、脾、肾、肺与肠中3种MHC基因极显著上调(P0.01),5-9d相继上调到最大值,随后下降。感染后5-7d,皮肤肌肉出现上调(P0.01),达峰值后出现下降趋势,且表达量丰富,直到16d基因表达量仍显著高于其他各组织表达7水平。结果表明CGSPV感染对大鲵MHC基因表达有明显影响,大鲵MHC在抗CGSRV感染的过程中有重要作用。
【关键词】：大鲵(Andrias davidianus) 大鲵蛙病毒(CGSRV) 组织嗜性 病理损伤 MHC基因表达
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S947.3
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 简缩词表7-10
• 第一章 文献综述10-20
• 1 蛙病毒分类10
• 2 蛙病毒生物学特征10-11
• 3 蛙病毒的分布与危害11-12
• 4 蛙病毒感染的诊断与防治12-14
• 5 蛙病毒感染后在宿主体内的分布14
• 6 蛙病毒感染的组织病理损伤14-15
• 7 病原感染对宿主免疫相关基因表达的影响15-19
• 7.1 主要组织相容性复合体(MHC)15-17
• 7.1.1 MHC结构和功能15-16
• 7.1.2 MHC基因在组织中的表达16
• 7.1.3 MHC与抗病之间的关系16-17
• 7.2 其他免疫相关因子17-19
• 8 研究的目的和意义19-20
• 第二章 CGSRV感染后的组织病理学研究20-30
• 1 材料20-21
• 1.1 动物20
• 1.2 主要试剂、材料20-21
• 1.3 主要仪器21
• 2 方法21-22
• 2.1 人工感染与临床症状观察21
• 2.2 剖检变化观察与样品采集21
• 2.3 组织病理损伤观察21-22
• 2.3.1 石蜡切片的制备21-22
• 2.3.2 结果观察22
• 3 结果22-28
• 3.1 CGSRV感染后临床症状与剖检变化观察22-23
• 3.2 组织病理变化23-28
• 4 讨论28-30
• 4.1 CGSRV感染大鲵的临床症状28
• 4.2 CGSRV感染大鲵的组织病理损伤特点28-30
• 第三章 CGSRV感染大鲵的组织嗜性与分布研究30-38
• 1 材料30
• 2 方法30-32
• 2.1 样品采集30-31
• 2.2 组织DNA提取31
• 2.3 qPCR方法灵敏度测定以及标准曲线的建立31-32
• 2.3.1 质粒标准品浓度测定及拷贝数计算31
• 2.3.2 标准曲线的建立以及扩增灵敏度检测31-32
• 2.3.3 qPCR定量检测CGSRV组织分布情况32
• 3 结果32-35
• 3.1 引物溶解曲线分析32
• 3.2 扩增曲线以及标准曲线32-33
• 3.3 CGSRV感染后病毒在体内的动态分布33-35
• 4 讨论35-38
• 4.1 病原在组织中分布的检测方法分析35-36
• 4.2 CGSRV动态分布与组织嗜性分析36-38
• 第四章 CGSRV感染对大鲵MHC基因表达影响的研究38-51
• 1 材料38
• 2 方法38-41
• 2.1 样品采集38-39
• 2.2 总RNA的提取和cDNA的合成39-40
• 2.2.1 组织RNA提取39
• 2.2.3 cDNA合成39-40
• 2.3 MHC基因在组织中表达量的测定40-41
• 2.3.1 引物的设计与合成40-41
• 2.3.2 大鲵组织中MHC基因的检测41
• 2.4 数据处理分析41
• 3 结果41-48
• 3.1 CGSRV感染对大鲵MHC Ⅰ基因表达量的影响42-44
• 3.2 CGSRV感染对大鲵MHC ⅡA基因表达量的影响44-46
• 3.3 CGSRV感染对大鲵MHC ⅡB基因表达量的影响46-48
• 4 讨论48-51
• 结论51-52
• 参考文献52-59
• 致谢59-60
• 作者攻读硕士学位期间参与发表的学术论文60

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本文编号：342368