矮秆蓖麻天冬氨酸蛋白酶基因的克

发布时间：2021-10-23 14:02

　　目的克隆表达矮秆蓖麻（Ricinus communis L）天冬氨酸蛋白酶（aspartic protease,AP）基因（RcAP）并进行蛋白纯化。方法 Q-PCR法验证高秆及矮秆蓖麻六叶期叶片RcAP基因表达量;提取矮秆蓖麻六叶期叶片总RNA,PCR扩增RcAP基因,克隆至pETM30载体中,构建重组表达质粒pETM30-RcAP[含谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione-Stransferase,GST）标签],转化至E.coli DH5α感受态细胞中,优化IPTG诱导浓度及温度,SDS-PAGE分析目的蛋白的可溶性;采用亲和层析纯化重组蛋白GST-RcAP。结果矮秆蓖麻RcAP基因表达量为高秆蓖麻RcAP基因的3.7倍;经PCR及双酶切鉴定,重组表达质粒pETM30-RcAP构建正确;最适诱导条件为0.1 mmol/L IPTG 16℃诱导;重组蛋白GST-RcAP以可溶形式表达,相对分子质量约为62 000;纯化的重组蛋白GST-RcAP浓度为6 mg/mL。结论成功构建了重组表达质粒pETM30-RcAP,获得了可溶性重组蛋白GST-RcAP,本研究为解析RcAP蛋白... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(10)CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

Rc AP基因m RNA相对表达量验证结果

Rc AP基因PCR产物电泳图

重组蛋白GST-Rc AP经12%SDS-PAGE分析，相对分子质量约为61 000，以可溶形式存在于上清中，可用于目的蛋白的纯化，见图7。图4 重组表达质粒p ETM30-Rc AP的双酶切鉴定（NcoⅠ/XhoⅠ）

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3453318