疫苗免疫前后草鱼肠组织的差异转录组学分析及关键基因的表达载体构建与表达

发布时间：2021-11-04 11:24

　　拟态弧菌（Vibrio mimicus）是一种常见的病原弧菌,可引起养殖鱼类严重的腹水病,给水产养殖业造成较大经济损失。为了有效防控鱼类腹水病,本实验室前期构建了拟态弧菌双靶向核酸疫苗,并经动物免疫试验证实该疫苗具有良好的肠黏膜免疫增强作用,但其确切分子调控机制尚不清楚,需要深入研究。高通量RNA测序技术是（RNA-seq）目前发展最成熟、应用最广的转录组学研究方法。该技术具有高通量、精确,无论有无物种基因组或基因信息,均能直接对物种进行全面转录组分析,且可检测到低丰度的稀有转录本等优势,也为鱼类黏膜免疫调控机制的研究提供了有效方法。对此,本课题在制备拟态弧菌双靶向核酸疫苗的基础上,以口灌方式免疫草鱼,利用RNA-seq技术对免疫前后草鱼肠组织进行差异转录组学分析,探明关键免疫相关的差异表达基因及其涉及通路,并构建其表达载体。主要研究内容和结果总结如下:1)拟态弧菌双靶向核酸疫苗制备、免疫及样品采集。论文按照本实验室曹际建立的方法制备拟态弧菌双靶向核酸疫苗。首先大量抽提拟态弧菌内靶向核酸疫苗（pcDNA3.1-Iclp-Ovepis）,然后制备大肠杆菌冻干菌蜕（DH5α-BG）,最后将... 

【文章来源】：安徽农业大学安徽省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１免疫组与对照组草鱼肠组织总ＲＮＡ的提取??Ｍ：?ＤＮＡ标准分子量：１－６：分别代表６份样品（Ｉａｌ、Ｉａ２、丨ａ３、Ｉｂｌ、Ｉｂ２、Ｉｂ３）中的总ＲＮＡ

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【参考文献】：
期刊论文
[1]基于Iclp的拟态弧菌OmpUAP真核表达重组质粒的构建及其免疫效果初步评价[J]. 刘艳,丁淑荃,陶会竹,曹际,周昊,李槿年.  安徽农业大学学报. 2017(03)
[2]拟态弧菌的绿色荧光蛋白标记及其在感染草鱼体内的动态分布[J]. 高会会,侯立婷,李槿年,黄安宁.  水产学报. 2015(04)
[3]转录组学技术在水产动物研究中的运用[J]. 罗辉,叶华,肖世俊,郑曙明,王晓清,王志勇.  水产学报. 2015(04)
[4]应用Pull-down方法检测草鱼恒定链（Ii）与主要组织相容性复合体（MHC）分子的结合[J]. 林海斌,张娅菲,杨聪莺,罗兰芳,杨磊,余为一,刘洪明,陈芳芳.  农业生物技术学报. 2015(06)
[5]新一代高通量RNA测序数据的处理与分析[J]. 王曦,汪小我,王立坤,冯智星,张学工.  生物化学与生物物理进展. 2010(08)
[6]NLR:固有免疫模式识别受体中的一个重要家族[J]. 金伯泉.  现代免疫学. 2006(03)
[7]黑鲷幼鱼腹水病病原菌[J]. 王国良,郑天伦,金珊,陆彤霞.  中国兽医学报. 2003(01)
[8]弧菌属细菌及其所致海水养殖动物疾病[J]. 吴后波,潘金培.  中国水产科学. 2001(01)

博士论文
[1]草鱼NF-κB信号通路激活及其调控的分子机制[D]. 王海舟.南昌大学 2017
[2]草鱼核苷酸结合寡聚化结构域基因和γ-干扰素相关基因的克隆及其表达[D]. 陈文钦.华中农业大学 2010

硕士论文
[1]拟态弧菌靶向DNA疫苗对肠巨噬细胞活性及抗原递呈相关基因转录的影响[D]. 陶会竹.安徽农业大学 2018
[2]草鱼甘露糖受体基因的克隆与表达分析[D]. 王莉.华中农业大学 2014
[3]松江鲈（Trachidermus fasciatus）组织蛋白酶B和L的基因克隆、蛋白表达与表达模式分析[D]. 崔孟暄.山东大学 2012
[4]青岛文昌鱼ERK5，p38抗体的制备及体内蛋白表达的初步研究[D]. 刘召民.山东大学 2012
[5]草鱼（Ctenopharyngodon idella）Hsp90、Wap65基因的克隆、表达特性及功能分析[D]. 赵风云.南昌大学 2011



本文编号：3475628