甘蓝型油菜中5个脂酰-ACP硫酯酶基因的克隆及表达分析

发布时间：2021-11-08 04:31

　　油菜是世界上重要的食用油作物,中国目前每年菜籽油消费量为610万吨左右,约占食用植物油消费量的20%。普通菜籽含油量在42%左右,含有7%的饱和脂肪酸（16:0和18:0）,60%左右的单不饱和脂肪酸（18:1）,以及33%左右的多不饱和脂肪酸（18:2和18:3）。多不饱和脂肪酸营养价值高,但高含量的多不饱和脂肪酸使得菜籽油容易氧化、酸败,产生挥发性、难闻的有害物质,从而降低菜籽油的营养性和商品性。油酸营养价值高,而且对心血管系统有保健作用,可降低心脏病,动脉硬化的发生。高油酸菜籽油不容易氧化和酸败,商品性较普通菜籽油更高。因此提高菜籽含油量和油酸含量是目前油菜科研一个重要的研究方向。脂酰-ACP硫脂酶（faty acyl-ACP thioesterase）是脂肪酸合成中一个重要的酶。在质体中合成的脂肪酸在它的作用下水解成游离脂酰-CoA和ACP,从而达到终止了脂肪酸碳链延长。油菜中有fatA和fatB两个硫酯酶基因家族,且每个基因家族中有多个成员。脂酰-ACP硫脂酶不但影响种子中含油量的高低,还影响种子中脂肪酸组成。因此,研究油菜脂酰-ACP硫脂酶基因（fat）对于含油量和脂肪酸组... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 绪论
    1.1 脂酰-ACP硫脂酶(fatty acyl-[ACP]thioesterase)的种类与酶活性
    1.2 脂酰-ACP硫脂酶的结构
        1.2.1 脂酰-ACP硫脂酶的一级结构
        1.2.2 脂酰-ACP硫脂酶的二级结构
    1.3 油菜中的脂酰-ACP硫脂酶在油脂合成过程中的作用
    1.4 脂酰-ACP硫脂酶的研究现状
    1.5 脂酰-ACP硫脂酶基因在育种上的应用
    1.6 本研究的意义
    1.7 本研究主要内容
    1.8 技术路线
2 试验材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 基因及引物
        2.1.3 菌株及试剂
    2.2 方法
        2.2.1 试验材料的获得
        2.2.2 总RNA的提取
        2.2.3 cDNA的合成
        2.2.4 RT-qPCR检测
        2.2.5 脂酰-ACP硫酯酶基因CDS序列全长的获得
        2.2.6 载体连接
        2.2.7 酵母表达分析
        2.2.8 索氏抽提法测定酵母含油量
        2.2.9 拟南芥转化
3 结果与分析
    3.1 RNA的提取
    3.2 脂酰-ACP硫脂酶基因表达分析
        3.2.1 引物特异性分析
        3.2.2 RT-qPCR结果
    3.3 脂酰-ACP硫脂酶基因的酵母表达分析
        3.3.1 脂酰-ACP硫脂酶基因CDS序列的获得
        3.3.2 酵母表达载体构建
        3.3.3 脂肪酸组成分析
    3.4 酵母含油量测定
    3.5 拟南芥转化
4 讨论
参考文献
附录
    附录1 基因序列
    附录2 引物序列
    附录3 RNA提取方法
    附录4 CDNA合成方法
    附录5 胶回收方法
    附录6 SOC培养基配置方法
    附录7 YPD培养基配置方法
    附录8 大肠杆菌质粒提取
    附录9 酵母菌质粒提取
    附录10 SC-Ura酵母缺陷型培养基配置方法
    附录11 引物特异性分析
    附录12 转基因酵母脂肪酸组分分析
    附录13 转基因酵母含油量分析
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]四川丘陵区甘蓝型油菜高含油量资源创制探索(英文)[J]. 刘念,蒙大庆,汤天泽,范其新,李芝凡,李迎春,张体刚,范存留.  Agricultural Science & Technology. 2017(08)
[2]油茶脂酰辅酶A硫酯酶基因的克隆与表达分析[J]. 谭晓风,王建勇,龙洪旭,曾艳玲,梅芳芳,刘凯,陈鸿鹏.  植物生理学报. 2014(12)
[3]拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达[J]. 郝昭程,王腾飞,李忠奎,郝梓凯,戴琨,王瑞明.  生物工程学报. 2015(01)
[4]改良CTAB法提取油用向日葵成熟叶片的总RNA[J]. 周菲.  黑龙江农业科学. 2013(07)
[5]油菜种子油酸含量的遗传改良[J]. 杜海,郎春秀,王伏林,陈锦清,吴关庭.  核农学报. 2011(06)
[6]拟南芥硫酯酶基因（atfata）在大肠杆菌中的表达及其对游离脂肪酸合成的影响[J]. 程涛,杨建明,刘辉,张英伟,宋秋华,咸漠.  应用与环境生物学报. 2011(04)
[7]实时荧光定量PCR技术的操作实践[J]. 杨怡姝,孙晓娜,王小利,沈思嗣,李泽琳,曾毅.  实验室研究与探索. 2011(07)
[8]实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用[J]. 刘小荣,张笠,王勇平.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(02)
[9]植物脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶研究综述[J]. 王威浩,谭晓风.  经济林研究. 2009(02)
[10]高等植物的酰基-ACP硫酯酶研究进展[J]. 元冬娟,吴湃,江黎明.  中国油料作物学报. 2009(01)

博士论文
[1]中国油菜产业安全研究[D]. 王璐.华中农业大学 2014
[2]甘蓝型油菜SSR分子标记图谱构建和油酸含量QTL定位[D]. 杨燕宇.湖南农业大学 2011

硕士论文
[1]生物柴油基因工程菌的构建[D]. 范丽苹.北京化工大学 2013
[2]甘蓝型油菜FAD2、FAD3、FATB基因共干扰载体的构建及其遗传转化[D]. 刘睿洋.湖南农业大学 2012



本文编号：3483009