中华鳖Wnt4基因克隆及表达分析
发布时间：2021-11-12 18:42
通过RACE技术成功获得中华鳖（Pelodiscus sinensis）Wnt4基因的cDNA全长序列,并利用实时荧光定量PCR分析了该基因在不同组织、胚胎不同发育时期的表达特征以及Wnt激动剂（Wnt agonist 1）对其表达的影响。结果表明:中华鳖Wnt4基因cDNA全长2 432 bp,开放阅读框为1 095 bp,编码364个氨基酸。中华鳖Wnt4基因与海龟（Chelonia mydas）和三趾箱龟（Terrapene carolina triunguis）具有高度同源性。Wnt4基因在雌雄个体性腺中表达量最高,且雌性卵巢中表达水平显著高于雄性精巢（P<0.05）。在胚胎不同发育时期（14～21期）雌雄性之间有明显的表达差异（P<0.05）,推测其参与了中华鳖性别分化的过程。Wnt激动剂能上调Wnt4基因的表达水平,此结果为中华鳖性别分化机制的研究提供了参考。
【文章来源】：海洋渔业. 2020,42(06)北大核心CSCD
【文章页数】：11 页
【部分图文】：
中华鳖 Wnt4 基因
表1 中华鳖 Wnt4 基因扩增引物信息Tab.1 Information of primers for Wnt4 amplification in Pelodiscus sinensis 引物 Primer 序列(5′-3′) Sequence (5′-3′) 功能 Application Wnt4-CF GAGGTGATGGACTCGGTGCG 保守区 Wnt4-CR CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC Wnt4-3′-GSP AAAGTGCTGGTGCCGAAAAAC 3′RACE Wnt4-3′-NGSP TTCAAACCACACACGGATGAGGAC Wnt4-5′-GSP CCACTGGAAGCCCTGGGGACTGACC 5′RACE M13-47 CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC 菌落 PCR M13-48 CTAATACGACTCACTATAGGGCAA UPM CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT RACE 引物 UPM short CTAATACGACTCACTATAGGGC Wnt4-F GAGGTGATGGACTCGGTGCG 荧光定量 PCR Wnt4-R CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC 18sRNA-F AAAGGAATTGACGGAAGGGCAC 内参基因 18sRNA-R GCTCCACCAACTAAGAACGG中华鳖 Wnt4蛋白与海龟、三趾箱龟、美洲短吻鳄、裸鼢鼠、人、小鼠、斑马鱼、牙鲆、半滑舌鳎、栉孔扇贝和厚壳贻贝等 11 个物种的蛋白序列多重比较分析见图 2,其序列比较保守,与其他物种有 100 多个 Wnt 保守位点。
表2 不同物种与中华鳖Wnt4蛋白氨基酸序列同源性比对Tab.2 Comparative identity of amino acid sequence of Wnt4 物种 Species 登录号 Accession number 同源性 Identity 海龟 Chelonia mydas XP_027684015.1 91.74% 三趾箱龟 Terrapene carolina triunguis XP_024064527.1 91.74% 美洲短吻鳄 Alligator mississippiensis KYO 30022.1 89.17% 达马拉鼹鼠Fukomys damarensis KFO 32560.1 86.69% 裸鼢鼠 Heterocephalus glaber EHB 08913.1 86.69% 人 Homo sapiens BAC 23080.1 83.76% 小鼠 Mus musculus AAI 01963.1 83.48% 斑马鱼 Danio rerio AAA 96518.1 81.77% 牙鲆 Paralichthys olivaceus AGT 18276.1 81.77% 半滑舌鳎 Cynoglossus semilaevis AIJ 01347.1 80.91% 栉孔扇贝 Azumapecten farreri AFU 35435.1 67.47% 厚壳贻贝 Mytilus coruscus APJ 36641.1 65.09%图3 不同物种 Wnt4 蛋白氨基酸序列的系统进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]EsWnt-4基因的表达分析[J]. 刘志强,冯建彬,邱高峰. 海洋渔业. 2019(02)
[2]饲料蛋白质和脂肪水平对中华鳖生长性能、肌肉质构指标及肝脏相关基因表达的影响[J]. 吴凡,陆星,文华,田娟,刘伟,蒋明,杨长庚,喻丽娟,梁宏伟. 淡水渔业. 2018(01)
[3]中华鳖实时定量PCR内参基因的筛选与评价[J]. 刘文婷,张贝贝,张耀红,管越强. 内蒙古大学学报(自然科学版). 2017(05)
[4]三个不同品系中华鳖形态差异分析[J]. 梁宏伟,曹力欢,李翔,童苗苗,蒋业林,李忠,罗相忠,邹桂伟. 淡水渔业. 2017(04)
[5]厚壳贻贝Wnt4基因时空表达[J]. 徐跃峰,李一峰,梁箫,陈芋如,杨金龙. 水产学报. 2016(10)
[6]长牡蛎（Crassostrea gigas）Wnt4基因cDNA克隆与表达分析[J]. 杨梅,许飞,刘俊,李莉,张国范. 海洋与湖沼. 2015(01)
[7]栉孔扇贝wnt4基因cDNA克隆及表达分析[J]. 李海龙,刘建国,刘晓玲,张志峰. 中国水产科学. 2013(02)
硕士论文
[1]黄河鲤Wnt4基因的克隆、表达模式分析和Wnt信号通路基因的结构及功能分析[D]. 姬晓琳.河南师范大学 2016
[2]波纹唇鱼性别发育候选基因的克隆与表达研究[D]. 黄飞.海南大学 2014
[3]中华鳖性腺分化及温度对其影响[D]. 李慧君.河北大学 2012
本文编号：3491461
【文章来源】：海洋渔业. 2020,42(06)北大核心CSCD
【文章页数】：11 页
【部分图文】：
中华鳖 Wnt4 基因
表1 中华鳖 Wnt4 基因扩增引物信息Tab.1 Information of primers for Wnt4 amplification in Pelodiscus sinensis 引物 Primer 序列(5′-3′) Sequence (5′-3′) 功能 Application Wnt4-CF GAGGTGATGGACTCGGTGCG 保守区 Wnt4-CR CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC Wnt4-3′-GSP AAAGTGCTGGTGCCGAAAAAC 3′RACE Wnt4-3′-NGSP TTCAAACCACACACGGATGAGGAC Wnt4-5′-GSP CCACTGGAAGCCCTGGGGACTGACC 5′RACE M13-47 CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC 菌落 PCR M13-48 CTAATACGACTCACTATAGGGCAA UPM CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT RACE 引物 UPM short CTAATACGACTCACTATAGGGC Wnt4-F GAGGTGATGGACTCGGTGCG 荧光定量 PCR Wnt4-R CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC 18sRNA-F AAAGGAATTGACGGAAGGGCAC 内参基因 18sRNA-R GCTCCACCAACTAAGAACGG中华鳖 Wnt4蛋白与海龟、三趾箱龟、美洲短吻鳄、裸鼢鼠、人、小鼠、斑马鱼、牙鲆、半滑舌鳎、栉孔扇贝和厚壳贻贝等 11 个物种的蛋白序列多重比较分析见图 2,其序列比较保守,与其他物种有 100 多个 Wnt 保守位点。
表2 不同物种与中华鳖Wnt4蛋白氨基酸序列同源性比对Tab.2 Comparative identity of amino acid sequence of Wnt4 物种 Species 登录号 Accession number 同源性 Identity 海龟 Chelonia mydas XP_027684015.1 91.74% 三趾箱龟 Terrapene carolina triunguis XP_024064527.1 91.74% 美洲短吻鳄 Alligator mississippiensis KYO 30022.1 89.17% 达马拉鼹鼠Fukomys damarensis KFO 32560.1 86.69% 裸鼢鼠 Heterocephalus glaber EHB 08913.1 86.69% 人 Homo sapiens BAC 23080.1 83.76% 小鼠 Mus musculus AAI 01963.1 83.48% 斑马鱼 Danio rerio AAA 96518.1 81.77% 牙鲆 Paralichthys olivaceus AGT 18276.1 81.77% 半滑舌鳎 Cynoglossus semilaevis AIJ 01347.1 80.91% 栉孔扇贝 Azumapecten farreri AFU 35435.1 67.47% 厚壳贻贝 Mytilus coruscus APJ 36641.1 65.09%图3 不同物种 Wnt4 蛋白氨基酸序列的系统进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]EsWnt-4基因的表达分析[J]. 刘志强,冯建彬,邱高峰. 海洋渔业. 2019(02)
[2]饲料蛋白质和脂肪水平对中华鳖生长性能、肌肉质构指标及肝脏相关基因表达的影响[J]. 吴凡,陆星,文华,田娟,刘伟,蒋明,杨长庚,喻丽娟,梁宏伟. 淡水渔业. 2018(01)
[3]中华鳖实时定量PCR内参基因的筛选与评价[J]. 刘文婷,张贝贝,张耀红,管越强. 内蒙古大学学报(自然科学版). 2017(05)
[4]三个不同品系中华鳖形态差异分析[J]. 梁宏伟,曹力欢,李翔,童苗苗,蒋业林,李忠,罗相忠,邹桂伟. 淡水渔业. 2017(04)
[5]厚壳贻贝Wnt4基因时空表达[J]. 徐跃峰,李一峰,梁箫,陈芋如,杨金龙. 水产学报. 2016(10)
[6]长牡蛎（Crassostrea gigas）Wnt4基因cDNA克隆与表达分析[J]. 杨梅,许飞,刘俊,李莉,张国范. 海洋与湖沼. 2015(01)
[7]栉孔扇贝wnt4基因cDNA克隆及表达分析[J]. 李海龙,刘建国,刘晓玲,张志峰. 中国水产科学. 2013(02)
硕士论文
[1]黄河鲤Wnt4基因的克隆、表达模式分析和Wnt信号通路基因的结构及功能分析[D]. 姬晓琳.河南师范大学 2016
[2]波纹唇鱼性别发育候选基因的克隆与表达研究[D]. 黄飞.海南大学 2014
[3]中华鳖性腺分化及温度对其影响[D]. 李慧君.河北大学 2012
本文编号：3491461
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3491461.html
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