Napin启动子特异性表达油菜BnGPAT9基因
发布时间：2021-11-18 18:15
甘油三磷酸酰基转移酶（GPAT）基因编码参与植物油脂生物合成的酶。为了提高油菜籽含油量,促进油菜增产增油,改善菜籽油脂肪酸组分,克隆甘蓝型油菜Napin启动子与三酰甘油合成相关基因BnGPAT9,构建pBI121-Napin-BnGPAT9植物过表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥,采用气相色谱法分析种子中脂肪酸组分,通过索式抽提法测定种子中油脂含量,研究在种子中过表达BnGPAT9基因对种子油脂合成的影响。Napin启动子在线分析表明,克隆到的启动子具有大量TATA-box、CAAT-box以及ABRE、GCN4等特征元件,完全具备种子特异性表达功能;种子中脂肪酸组分分析显示,拟南芥种子中油酸（C18∶1）含量提高0.70～1.01百分点,亚油酸（C18∶2）和芥酸（C22∶1）含量降低;拟南芥种子含油量测定结果显示,种子中含油量显著增加1.91～2.56百分点。综上,甘蓝型油菜BnGPAT9基因对植物油脂合成具有重要作用,利用Napin启动子在拟南芥种子中过表达BnGPAT9基因可提高种子含油量并改善脂肪酸组成成分,为BnGPAT9基因应用于油菜油脂改良方面打下一定基础。
【文章来源】：华北农学报. 2020,35(04)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
PCR产物电泳图
表1 启动子调控区元件分析Tab.1 Cis-acting regulatory element analysis of promoter sequence 位点名称Site name 数量Amount 序列Sequence 位点功能Function of site ABRE 3 CACGTG/ACGTG/GACACGTGGC 参与脱落酸诱导的顺式作用元件 ARE 3 AAACCA 厌氧诱导的必须顺式调控元件 CAAT-box 17 CCAAT/CAAAT/CAATT/CAAT/CAAAT/ 启动子、增强子区域常见顺式作用元件 TGCAAATCT/CCCAATTT CAT-box 1 GCCACT 与分生组织表达有关的顺式作用元件 CCAAT-box 1 CAACGG MYBHv1结合位点 G-Box 1 CACGTT 参与光应答的顺式作用元件 G-box 2 CACGAC/TAACACGTAG 参与光应答的顺式作用元件 GATA-motif 1 GATAGGA 部分光应答元件 GCN4_motif 1 TGAGTCA 参与胚乳表达所需的顺式作用元件 MBSI 1 aaaAaaC(G/C)GTTA 参与黄酮类生物合成基因调控的MYB结合位点 TATA-box 18 TATA(核心序列Core sequence) 启动子核心元件2.3 pBI121-Napin-BnGPAT9表达载体构建
根据1.2.3试验方法构建pBI121-Napin-BnGPAT9植物表达载体(图3)。首先,Sac Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切pUCm-T-BnGPAT9和pBI121载体质粒,用BnGPAT9基因替换GUS基因,构建pBI121-BnGPAT9重组质粒(图3-A)。随后,改用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ快速内切酶,采用同样的方法酶切pUCm-T-Napin和pBI121-BnGPAT9载体质粒,用Napin基因替换CaMV35S启动子基因,构建pBI121-Napin-BnGPAT9植物表达载体(图3-B)。采用热激法将pBI121-Napin-BnGPAT9植物表达载体转化大肠杆菌DH5α,经PCR检测后保存阳性菌落,检测结果见图4。图4 重组质粒的菌落 PCR 鉴定电泳图
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘蓝型油菜BnGPAT9基因表达模式及其苗期非生物胁迫表达分析[J]. 邢蔓,周雪晴,何婷,张泽荣,岳宁燕,曾祥拱,邬贤梦,官春云,熊兴华. 中国油料作物学报. 2017(04)
[2]甘蓝型油菜GPAT9基因克隆与生物信息学分析[J]. 邢蔓,刘少锋,邬贤梦,官春云,熊兴华. 分子植物育种. 2016(12)
[3]油菜种子特异启动子Napin控制外源EGFP基因在芥菜中的表达[J]. 邹敏,唐佳佳,宋洪元. 中国蔬菜. 2012(14)
[4]油菜种子特异表达启动子pNapB和pFAE1的结构与功能比较研究[J]. 肖娜,武玉花,肖玲,吴刚,卢长明. 中国油料作物学报. 2008(01)
[5]中国油菜品种改良的中长期发展战略[J]. 王汉中. 中国油料作物学报. 2004(02)
[6]油菜种子特异表达napin基因启动子的克隆及序列分析[J]. 熊兴华,官春云,李恂,谭小力,李家洋. 生物技术. 2003(03)
[7]种子特异性启动子（napinB promoter）分离、表达载体构建及转基因植物获得[J]. 李丽,张景昱,杜桂森,宋艳茹. 植物学通报. 2001(02)
本文编号：3503372
【文章来源】：华北农学报. 2020,35(04)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
PCR产物电泳图
表1 启动子调控区元件分析Tab.1 Cis-acting regulatory element analysis of promoter sequence 位点名称Site name 数量Amount 序列Sequence 位点功能Function of site ABRE 3 CACGTG/ACGTG/GACACGTGGC 参与脱落酸诱导的顺式作用元件 ARE 3 AAACCA 厌氧诱导的必须顺式调控元件 CAAT-box 17 CCAAT/CAAAT/CAATT/CAAT/CAAAT/ 启动子、增强子区域常见顺式作用元件 TGCAAATCT/CCCAATTT CAT-box 1 GCCACT 与分生组织表达有关的顺式作用元件 CCAAT-box 1 CAACGG MYBHv1结合位点 G-Box 1 CACGTT 参与光应答的顺式作用元件 G-box 2 CACGAC/TAACACGTAG 参与光应答的顺式作用元件 GATA-motif 1 GATAGGA 部分光应答元件 GCN4_motif 1 TGAGTCA 参与胚乳表达所需的顺式作用元件 MBSI 1 aaaAaaC(G/C)GTTA 参与黄酮类生物合成基因调控的MYB结合位点 TATA-box 18 TATA(核心序列Core sequence) 启动子核心元件2.3 pBI121-Napin-BnGPAT9表达载体构建
根据1.2.3试验方法构建pBI121-Napin-BnGPAT9植物表达载体(图3)。首先,Sac Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切pUCm-T-BnGPAT9和pBI121载体质粒,用BnGPAT9基因替换GUS基因,构建pBI121-BnGPAT9重组质粒(图3-A)。随后,改用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ快速内切酶,采用同样的方法酶切pUCm-T-Napin和pBI121-BnGPAT9载体质粒,用Napin基因替换CaMV35S启动子基因,构建pBI121-Napin-BnGPAT9植物表达载体(图3-B)。采用热激法将pBI121-Napin-BnGPAT9植物表达载体转化大肠杆菌DH5α,经PCR检测后保存阳性菌落,检测结果见图4。图4 重组质粒的菌落 PCR 鉴定电泳图
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘蓝型油菜BnGPAT9基因表达模式及其苗期非生物胁迫表达分析[J]. 邢蔓,周雪晴,何婷,张泽荣,岳宁燕,曾祥拱,邬贤梦,官春云,熊兴华. 中国油料作物学报. 2017(04)
[2]甘蓝型油菜GPAT9基因克隆与生物信息学分析[J]. 邢蔓,刘少锋,邬贤梦,官春云,熊兴华. 分子植物育种. 2016(12)
[3]油菜种子特异启动子Napin控制外源EGFP基因在芥菜中的表达[J]. 邹敏,唐佳佳,宋洪元. 中国蔬菜. 2012(14)
[4]油菜种子特异表达启动子pNapB和pFAE1的结构与功能比较研究[J]. 肖娜,武玉花,肖玲,吴刚,卢长明. 中国油料作物学报. 2008(01)
[5]中国油菜品种改良的中长期发展战略[J]. 王汉中. 中国油料作物学报. 2004(02)
[6]油菜种子特异表达napin基因启动子的克隆及序列分析[J]. 熊兴华,官春云,李恂,谭小力,李家洋. 生物技术. 2003(03)
[7]种子特异性启动子（napinB promoter）分离、表达载体构建及转基因植物获得[J]. 李丽,张景昱,杜桂森,宋艳茹. 植物学通报. 2001(02)
本文编号：3503372
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3503372.html
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