黄瓜CsPIP2;4基因克隆分析及遗传转化体系研究
发布时间：2022-02-11 11:41
黄瓜（Cucumis sativus L.）是我国重要的设施栽培蔬菜,干旱导致其生长发育延迟,产量严重下降,果实品质变差。遗传转化验证作为当今研究基因功能、现代分子育种的重要方法,建立一套稳定的黄瓜遗传转化体系可为运用过量表达等技术进行黄瓜功能基因组学研究提供技术支撑。本研究以黄瓜PIP2;4基因为研究对象,克隆了PIP2;4基因并进行了生物信息学分析和遗传转化研究,主要结果如下:（1）生物信息学表明,CsPIP2;4长852 bp,编码283个氨基酸,CsPIP2;4蛋白具有疏水性、无信号肽段、有跨膜结构,是定位在质膜的内在蛋白,以无规则卷曲和α-螺旋结构为主,具有典型的水通道蛋白结构功能域,属于MIP超家族;蛋白质同源比显示,CsPIP2;4与甜瓜PIP2;7的亲缘关系最近。q PCR结果表明CsPIP2;4表达受干旱诱导,可能参与干旱胁迫的调控。（2）构建了由Ca MV 35S启动子调控的表达载体p CAMBIA 2300s-PIP2;4;对黄瓜‘9930’不定芽和根诱导进行选择压的筛选,最佳筛选浓度为150 mg/L Kan,而‘新泰密刺’生根培养基的最佳浓度为100 mg/L...
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黄瓜总RNA琼脂糖凝胶电泳图
192.2.2目的片段克隆依据黄瓜基因组数据库查询得到黄瓜PIP2;4基因编码区序列，设计引物。以cDNA为模板，进行PCR扩增，获得目的片段PIP2;4，将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳(图2.2)，目的条带的大小与估计的片段大小符合852bp。图2.2PCR扩增产物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大肠杆菌PCR鉴定阳性单克隆图2.3菌液PCR扩增产物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表达载体与目的基因的检验测序结果在GenBank数据库中在线进行Blast。黄瓜PIP2;4基因全长核苷酸序列及其推导的氨基酸序列，用DNAMAN进行黄瓜PIP2;4基因序列比对，目的基因全长852bp。结果（图2.4）表明所得片段为黄瓜PIP2;4基因序列。
192.2.2目的片段克隆依据黄瓜基因组数据库查询得到黄瓜PIP2;4基因编码区序列，设计引物。以cDNA为模板，进行PCR扩增，获得目的片段PIP2;4，将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳(图2.2)，目的条带的大小与估计的片段大小符合852bp。图2.2PCR扩增产物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大肠杆菌PCR鉴定阳性单克隆图2.3菌液PCR扩增产物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表达载体与目的基因的检验测序结果在GenBank数据库中在线进行Blast。黄瓜PIP2;4基因全长核苷酸序列及其推导的氨基酸序列，用DNAMAN进行黄瓜PIP2;4基因序列比对，目的基因全长852bp。结果（图2.4）表明所得片段为黄瓜PIP2;4基因序列。
【参考文献】：
期刊论文
[1]作物气孔的作用及其影响因素的研究进展[J]. 杨天乐,吴峰峰,刘涛,武威,周平,孙成明. 北方园艺. 2020(03)
[2]干旱胁迫下北苍术的光合特性及抗逆生理响应[J]. 周秀丽,翁丽丽,姜大成,肖春萍. 中药材. 2020(01)
[3]干旱胁迫与复水对苦荞生长及叶片内源激素含量的影响[J]. 董馥慧,裴红宾,张永清,杨甜,薛小娇. 中国农业科技导报. 2019(12)
[4]高温-干旱对沙漠植物花花柴光合作用的影响[J]. 许疆维,孙万豪,吴文博,王选华,王彦芹. 分子植物育种. 2019(12)
[5]干旱胁迫下不同抗旱水平马铃薯叶片蛋白质组学分析[J]. 张凤军,叶景秀,师理,阮建平,王舰. 江苏农业科学. 2018(09)
[6]干旱胁迫对八宝景天叶片生理的影响[J]. 刘紫娟,袁蕊,王娜,李炳言,贾斯淳,宗毓铮,李萍,郝兴宇. 山西农业科学. 2018(04)
[7]甜菜幼苗叶片抗氧化系统对干旱胁迫的响应[J]. 李国龙,孙亚卿,邵世勤,张永丰. 作物杂志. 2017(05)
[8]基于一种新的基团编码的蛋白质二级结构预测[J]. 张帅燕,刘毅慧. 智能计算机与应用. 2017(03)
[9]干旱胁迫下沙芥幼苗叶片光合特性和叶绿素荧光参数的变化[J]. 王萍,张希吏,石磊. 干旱地区农业研究. 2017(03)
[10]干旱胁迫下蒙古沙冬青叶片蛋白质组学研究[J]. 付晨熙,肖自华,高飞,周宜君. 生物技术通报. 2017(06)
博士论文
[1]刺槐幼苗对水分胁迫的响应：基于生长、生理及非结构性碳的分配与动态[D]. 杨斌.西北农林科技大学 2019
[2]黄瓜高效遗传转化体系的建立和嫩果白皮基因w的图位克隆与功能分析[D]. 刘汉强.西北农林科技大学 2018
[3]建立黄瓜遗传转化和基因编辑技术体系以创制黄瓜全雌系种质材料[D]. 杨丽.中国农业科学院 2018
[4]不同条件下树木死亡的水力失衡和碳饥饿机制[D]. 陈志成.中国林业科学研究院 2016
[5]外源bar+nas双价基因转化多年生黑麦草的研究[D]. 蔡能.湖南农业大学 2008
硕士论文
[1]苹果质膜水通道蛋白基因PIP2;1的耐旱及耐盐性功能分析[D]. 刘海莉.西北农林科技大学 2019
[2]干旱胁迫下凹叶厚朴的生理响应及差异蛋白表达分析[D]. 陈剑成.福建农林大学 2017
[3]干旱胁迫对四种植物碳水过程的影响及其致死机制探究[D]. 许悦.仲恺农业工程学院 2017
[4]响应干旱胁迫的黄瓜水通道蛋白基因Csa011929和Csa012726的克隆与功能分析[D]. 吴雪.浙江农林大学 2015
[5]四种连翘属植物抗旱性比较[D]. 王阿丽.河北农业大学 2015
[6]锦鸡儿属（Caragana Fabr.）三种植物水分关系与抗旱性研究[D]. 李凤玲.内蒙古大学 2009
[7]干旱胁迫及复水对豌豆根系生长及内源激素含量的影响[D]. 轩春香.甘肃农业大学 2008
[8]水分胁迫对酿酒葡萄黑比诺幼苗生理生化特性的影响[D]. 何卫军.西北农林科技大学 2008
[9]调亏灌溉对温室黄瓜（Cucumis sativus L.）生长发育和产量品质的影响[D]. 常莉飞.西北农林科技大学 2007
[10]海藻糖合酶基因遗传转化烟草的研究[D]. 汤火龙.华南热带农业大学 2003
本文编号：3620213
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黄瓜总RNA琼脂糖凝胶电泳图
192.2.2目的片段克隆依据黄瓜基因组数据库查询得到黄瓜PIP2;4基因编码区序列，设计引物。以cDNA为模板，进行PCR扩增，获得目的片段PIP2;4，将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳(图2.2)，目的条带的大小与估计的片段大小符合852bp。图2.2PCR扩增产物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大肠杆菌PCR鉴定阳性单克隆图2.3菌液PCR扩增产物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表达载体与目的基因的检验测序结果在GenBank数据库中在线进行Blast。黄瓜PIP2;4基因全长核苷酸序列及其推导的氨基酸序列，用DNAMAN进行黄瓜PIP2;4基因序列比对，目的基因全长852bp。结果（图2.4）表明所得片段为黄瓜PIP2;4基因序列。
192.2.2目的片段克隆依据黄瓜基因组数据库查询得到黄瓜PIP2;4基因编码区序列，设计引物。以cDNA为模板，进行PCR扩增，获得目的片段PIP2;4，将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳(图2.2)，目的条带的大小与估计的片段大小符合852bp。图2.2PCR扩增产物Figure2.2PCRamplificationproduct注：M：DNAMarker2000I：扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproduct2.2.3大肠杆菌PCR鉴定阳性单克隆图2.3菌液PCR扩增产物Figure2.3PCRamplificationproductofbacterial注：M：DNAMarker2000I：菌液扩增产物Note:M:DNAMarker2000I:Theamplificationproductofbacterial2.2.4表达载体与目的基因的检验测序结果在GenBank数据库中在线进行Blast。黄瓜PIP2;4基因全长核苷酸序列及其推导的氨基酸序列，用DNAMAN进行黄瓜PIP2;4基因序列比对，目的基因全长852bp。结果（图2.4）表明所得片段为黄瓜PIP2;4基因序列。
【参考文献】：
期刊论文
[1]作物气孔的作用及其影响因素的研究进展[J]. 杨天乐,吴峰峰,刘涛,武威,周平,孙成明. 北方园艺. 2020(03)
[2]干旱胁迫下北苍术的光合特性及抗逆生理响应[J]. 周秀丽,翁丽丽,姜大成,肖春萍. 中药材. 2020(01)
[3]干旱胁迫与复水对苦荞生长及叶片内源激素含量的影响[J]. 董馥慧,裴红宾,张永清,杨甜,薛小娇. 中国农业科技导报. 2019(12)
[4]高温-干旱对沙漠植物花花柴光合作用的影响[J]. 许疆维,孙万豪,吴文博,王选华,王彦芹. 分子植物育种. 2019(12)
[5]干旱胁迫下不同抗旱水平马铃薯叶片蛋白质组学分析[J]. 张凤军,叶景秀,师理,阮建平,王舰. 江苏农业科学. 2018(09)
[6]干旱胁迫对八宝景天叶片生理的影响[J]. 刘紫娟,袁蕊,王娜,李炳言,贾斯淳,宗毓铮,李萍,郝兴宇. 山西农业科学. 2018(04)
[7]甜菜幼苗叶片抗氧化系统对干旱胁迫的响应[J]. 李国龙,孙亚卿,邵世勤,张永丰. 作物杂志. 2017(05)
[8]基于一种新的基团编码的蛋白质二级结构预测[J]. 张帅燕,刘毅慧. 智能计算机与应用. 2017(03)
[9]干旱胁迫下沙芥幼苗叶片光合特性和叶绿素荧光参数的变化[J]. 王萍,张希吏,石磊. 干旱地区农业研究. 2017(03)
[10]干旱胁迫下蒙古沙冬青叶片蛋白质组学研究[J]. 付晨熙,肖自华,高飞,周宜君. 生物技术通报. 2017(06)
博士论文
[1]刺槐幼苗对水分胁迫的响应：基于生长、生理及非结构性碳的分配与动态[D]. 杨斌.西北农林科技大学 2019
[2]黄瓜高效遗传转化体系的建立和嫩果白皮基因w的图位克隆与功能分析[D]. 刘汉强.西北农林科技大学 2018
[3]建立黄瓜遗传转化和基因编辑技术体系以创制黄瓜全雌系种质材料[D]. 杨丽.中国农业科学院 2018
[4]不同条件下树木死亡的水力失衡和碳饥饿机制[D]. 陈志成.中国林业科学研究院 2016
[5]外源bar+nas双价基因转化多年生黑麦草的研究[D]. 蔡能.湖南农业大学 2008
硕士论文
[1]苹果质膜水通道蛋白基因PIP2;1的耐旱及耐盐性功能分析[D]. 刘海莉.西北农林科技大学 2019
[2]干旱胁迫下凹叶厚朴的生理响应及差异蛋白表达分析[D]. 陈剑成.福建农林大学 2017
[3]干旱胁迫对四种植物碳水过程的影响及其致死机制探究[D]. 许悦.仲恺农业工程学院 2017
[4]响应干旱胁迫的黄瓜水通道蛋白基因Csa011929和Csa012726的克隆与功能分析[D]. 吴雪.浙江农林大学 2015
[5]四种连翘属植物抗旱性比较[D]. 王阿丽.河北农业大学 2015
[6]锦鸡儿属（Caragana Fabr.）三种植物水分关系与抗旱性研究[D]. 李凤玲.内蒙古大学 2009
[7]干旱胁迫及复水对豌豆根系生长及内源激素含量的影响[D]. 轩春香.甘肃农业大学 2008
[8]水分胁迫对酿酒葡萄黑比诺幼苗生理生化特性的影响[D]. 何卫军.西北农林科技大学 2008
[9]调亏灌溉对温室黄瓜（Cucumis sativus L.）生长发育和产量品质的影响[D]. 常莉飞.西北农林科技大学 2007
[10]海藻糖合酶基因遗传转化烟草的研究[D]. 汤火龙.华南热带农业大学 2003
本文编号：3620213
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