农杆菌介导大麦无筛选标记转基因植株的获得

发布时间：2022-02-22 19:47

　　【目的】目前,国内外大麦遗传转化主要利用Golden Promise品种,基因依赖性严重,尤其是大麦的转化效率较低,并且获得安全型转基因大麦植株对其进一步产业化非常重要。建立高效、无筛选标记大麦遗传转化体系,拓展大麦遗传转化的受体基因型,为大麦基因功能解析和大麦转基因育种及商业化种植提供技术保障。【方法】以优良大麦品种Vlamingh为受体,取开花授粉后14 d左右的幼胚为转化材料,通过对培养基成分及培养步骤优化,建立农杆菌介导的高效遗传转化体系,并利用该体系将Bar和GUS在不同T-DNA区段的双T-DNA表达载体pWMB123转化大麦,获得候选转基因植株,然后利用PCR、Bar试纸条、组织化学染色和Southern blot等检测方法,在T1代转基因植株中成功获得无筛选标记大麦转基因植株。【结果】在愈伤组织分化阶段,发现培养基中添加1.0 mg·L^-1 KT、0.5 mg·L^-1 6-BA和0.05 mg·L^-1 NAA明显促进愈伤组织分化。在转基因植株生根阶段,发现采用添加1.0 mg·L^-1... 

【文章来源】：中国农业科学. 2020,53(18)北大核心CSCD

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 植物材料和表达载体
    1.2 培养基
    1.3 农杆菌介导转化大麦幼胚
        1.3.1 取样和灭菌
        1.3.2 农杆菌侵染和共培养
        1.3.3 愈伤组织的诱导
        1.3.4 愈伤组织的分化，转基因苗的生根及移栽
    1.4 T0代转基因植株的鉴定
    1.5 T1代中无筛选标记转基因植株筛选
    1.6 Southern blot杂交
2 结果
    2.1 不同培养基对大麦愈伤组织分化植株和生根的影响
    2.2 大麦转基因T0代阳性植株的获得和检测
    2.3 T1代中无筛选标记转基因大麦植株的获得
3 讨论
    3.1 大麦遗传转化体系优化
    3.2 无筛选标记转基因大麦植株获得效率
    3.3 获得无筛选标记转基因植物的意义
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]啤酒大麦品种甘啤4号成熟胚再生体系的建立[J]. 马玲珑,任盼荣,汪军成,孟亚雄,马小乐,李葆春,王化俊.  分子植物育种. 2015(03)
[2]利用RNAi抑制B-hordein合成降低大麦籽粒蛋白质含量[J]. 李静雯,张正英,令利军,李淑洁.  中国农业科学. 2014(19)
[3]大麦苏啤4号幼胚愈伤组织的诱导及植株的高频再生[J]. 余桂红,张旭,孙晓波,马鸿翔.  江苏农业学报. 2013(05)
[4]西北地区特色大麦品种成熟胚离体培养的初步研究[J]. 王兴珍,林国梁,赖勇,杨轲,孟亚雄,李葆春,马小乐,尚勋武,王化俊.  麦类作物学报. 2013(02)
[5]优良大麦品种花30幼胚遗传转化体系的优化[J]. 高润红,杜志钊,郭桂梅,邹磊,何婷,陈志伟,李梁,陆瑞菊,黄剑华.  植物遗传资源学报. 2012(05)
[6]根癌农杆菌介导的大麦茎尖转化研究[J]. 黎冬华,廖玉才,李和平.  麦类作物学报. 2012(01)
[7]小麦转基因方法及其评述[J]. 叶兴国,陈明,杜丽璞,徐惠君.  遗传. 2011(05)
[8]根癌农杆菌介导的大麦幼胚遗传转化影响因素研究[J]. 李静雯,张正英.  大麦与谷类科学. 2010(02)
[9]甘啤4号大麦幼胚愈伤组织诱导及植株再生的研究[J]. 闫永荣,张正英,李静雯,李淑洁.  分子植物育种. 2010(01)
[10]大麦成熟胚愈伤组织的诱导和植株再生的研究[J]. 郭晓琳,张红伟,刘欣洁,刘亚娟,张锋,孙东发,谭振波.  植物遗传资源学报. 2005(04)

硕士论文
[1]农杆菌介导miR396基因对大麦愈伤组织的遗传转化[D]. 马春业.华中农业大学 2016
[2]TrxS的表达及其对啤酒大麦发芽种子水解酶和贮藏物质降解的影响[D]. 孔维威.河南农业大学 2006



本文编号：3640107