UPF0118家族中一个具有钠/氢逆向转运活性的未知功能蛋白基因的克隆与功能分析

发布时间：2022-05-02 23:42

　　中度嗜盐菌（Halophilic bacteria）泛指能够在3%-15%的Na Cl存在时表现出最适生长的微生物类群。中度嗜盐菌与一般的非嗜盐性细菌相比较,具有特殊的代谢途径、生理生化结构、以及独特的遗传学特性。喜盐芽孢杆菌（Halobacillus sp.）NEAU-ST10-40是本实验室从安达市分离得到的一株中度嗜盐菌,并已经鉴定该菌株代表喜盐芽孢杆菌属（Halobacillus）的一个新种,并将其命名为安达喜盐芽孢杆菌（Halobacillus andaensis）模式菌株NEAU-ST10-40T。本实验采用大肠杆菌（Escherichia coli）缺陷株KNabc（Δnha A,Δnha B,Δcha A）基因功能互补法和基因文库筛选法,从NEAU-ST10-40T中克隆得到1个能够使大肠杆菌（E.coli）KNabc在0.3MNa Cl的LBK培养基上生长的重组子。此重组子在M13F方向的序列分析显示,该重组子包含的外源基因片段长4442 bp,该片段含有4个开放阅读框（ORF1-4）以及各自的SD序列和推测的启动子序列。其中有3个完整的开放阅读框（ORF2-4）,O... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 中度嗜盐菌的嗜盐机理
        1.1.1 相容性溶质
        1.1.2 Na~+/H~+逆向转运蛋白
    1.2 中度嗜盐菌的研究
    1.3 喜盐芽孢杆菌NEAU-ST10-40~T
    1.4 UPF0118家族蛋白
    1.5 论文研究的目标及研究内容
        1.5.1 研究目标
        1.5.2 研究内容
2 材料与方法
    2.1 喜盐芽孢杆菌NEAU-ST10-40T中相关基因的克隆
        2.1.1 实验所需材料
        2.1.2 实验方法
    2.2 外源基因片段的测序及序列分析
    2.3 外源基因的功能研究
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 表达载体pET28b-UPF0118，pET22b-UPF0118的构建
        2.4.1 材料
        2.4.2 方法
    2.5 pET22b-UPF0118的表达及Western blot实验
        2.5.1 材料
        2.5.2 方法
3 结果与分析
    3.1 喜盐芽孢杆菌NEAU-ST10-40~T钠离子输出相关基因的克隆
        3.1.1 基因组DNA的部分酶切
        3.1.2 阳性克隆的筛选
    3.2 外源基因的测序及序列分析
        3.2.1 KNabc/p UC-DP61携带的外源基因的测序及序列分析
        3.2.2 UPF0118的亚克隆与耐盐碱测试
    3.3 反转膜活性的测定
        3.3.1 E.coli KNabc中阳离子/H~+逆向转运活性的测定结果
        3.3.2 pH值范围（pH profile）的测定结果
        3.3.3 K_(0.5)值的测定结果
    3.4 重组表达载体pET-22b-UPF0118的构建和表达
        3.4.1 重组表达载体pET-22b-UPF0118的构建
        3.4.2 重组表达载体pET-22b-UPF0118在大肠杆菌中的诱导表达
4 讨论
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]中度嗜盐菌的研究进展[J]. 任培根,周培瑾.  微生物学报. 2003(03)



本文编号：3650191