利用RNAi技术沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因

发布时间：2022-08-11 19:01

　　【目的】明确沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因（CmTre2）对其生长发育的影响,为稻纵卷叶螟的防治奠定理论基础。【方法】基于RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,针对稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因（CmTre2）设计靶位点,体外合成双链RNA（dsCmTre2）,将其注射入稻纵卷叶螟3龄幼虫体内,观察试虫表型变化,用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测CmTre2的表达水平,测定酶活力。【结果】注射dsCmTre2的幼虫取食量明显下降,生长发育阻滞,体型变小,出现畸形和死亡现象。注射dsCmTre2后5 d,幼虫死亡率明显高于对照组,存活幼虫体重明显轻于对照组;CmTre2和几丁质合成酶B基因（CmCHSB）的表达量较对照分别下降53.70%和34.41%;膜结合型海藻糖酶活力较对照组下降35.61%。【结论】CmTre2基因对稻纵卷叶螟的生长发育具有重要作用,该基因的沉默影响几丁质合成,引起发育障碍。该研究结果为进一步利用RNAi技术在田间防治稻纵卷叶螟奠定了基础。 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 靶位点的设计
        1.2.2 引物设计
        1.2.3 dsRNA的合成与注射
        1.2.4 沉默CmTre2及其对几丁质合成酶基因的影响
        1.2.5 海藻糖酶活性测定
    1.3 数据统计与分析
2 结果与分析
    2.1 靶基因CmTre2的沉默效应
    2.2 沉默CmTre2后稻纵卷叶螟的生长发育
    2.3 沉默CmTre2后几丁质合成酶基因基因的表达
    2.4 RNA干扰海藻糖酶的活性
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]RNAi技术在农业害虫防治中的应用研究进展[J]. 王聪,蔡普默,张琪文,杨燕川,陈家骅.  中国植保导刊. 2018(06)
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[3]绿僵菌及其与dsRNA混合使用对褐飞虱的防治效果[J]. 潘春艳,蔡尤俊,李腾超,张文庆.  环境昆虫学报. 2016(06)
[4]飞蝗海藻糖酶基因的分子特性及功能[J]. 刘晓健,孙亚文,崔淼,马恩波,张建珍.  中国农业科学. 2016(22)
[5]稻纵卷叶螟海藻糖酶基因的克隆、分子特性和表达分析[J]. 田宇,杜娟,李尚伟,李娇,王爽.  昆虫学报. 2016(06)
[6]昆虫海藻糖与海藻糖酶的特性及功能研究[J]. 秦加敏,罗术东,和绍禹,吴杰.  环境昆虫学报. 2015(01)
[7]昆虫海藻糖酶的基因特性及功能研究进展[J]. 唐斌,魏苹,陈洁,王世贵,张文庆.  昆虫学报. 2012(11)
[8]灰飞虱海藻糖酶基因的克隆及RNA干扰效应[J]. 张倩,鲁鼎浩,蒲建,吴敏,韩召军.  昆虫学报. 2012(08)
[9]昆虫几丁质合成及其调控研究前沿[J]. 张文庆,陈晓菲,唐斌,田宏刚,陈洁,姚琼.  应用昆虫学报. 2011(03)
[10]稻纵卷叶螟的为害症状与发生规律[J]. 钟承茂.  农技服务. 2008(01)

硕士论文
[1]赤拟谷盗海藻糖酶基因调控几丁质合成及能量代谢的功能研究[D]. 魏苹.杭州师范大学 2013
[2]飞蝗UAPs的分子特性及功能研究[D]. 李峰.山西大学 2012



本文编号：3675211