内毒素受体TLR4基因多态性与脓毒症易感性的关系及机制研究

发布时间：2017-05-15 15:27

  本文关键词：内毒素受体TLR4基因多态性与脓毒症易感性的关系及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的:脓毒症和脓毒性休克是当前危重症患者死亡的主要原因,是亟待解决的现代医学难题。脓毒症的发病机制至今未明,一般认为是遗传背景、病原微生物和环境因素多重作用的共同结果,其中遗传因素作为个体对病原微生物和环境因素反应的背景作用越来越受到人们的关注。TLR4作为识别革兰阴性细菌致病成分的“模式”识别受体,在脓毒症的发生与发展中具有重要地位。TLR4与革兰阴性菌细胞壁主要成分脂多糖(lippolysaccharide,LPS)结合,将刺激信号传入宿主细胞内,介导革兰阴性菌的宿主非特异炎性反应。本研究旨在探讨中国江苏汉族人群中TLR4基因多态性与脓毒症发生风险及严重程度的相关性,并对阳性关联SNP的生物学意义进行初步探索。方法与资料:采用病例-对照研究设计,通过TLR4基因的连锁不平衡结构选择标签SNP(tagging SNP,tag SNP),应用Sequenom Mass ARRAY SNP检测技术对TLR4基因的标签SNP进行基因型分析。采用非条件Logistic回归模型,对性别、年龄、吸烟、饮酒、APACHEⅡ评分和慢性病状态等混杂因素进行校正,并在模型中加入相关变量的交互项,评估TLR4基因单核苷酸多态性与脓毒症的易感性,以及严重脓毒症、脓毒症休克、多器官功能障碍综合征和死亡等脓毒症继发表型的相关性。针对有统计学意义的阳性关联SNP,应用流式细胞技术观察全血LPS刺激前后,单核细胞表面CD14、TLR4、IL-6R蛋白表达变化规律,以及TLR4基因rs11536889 SNP三种不同基因型对LPS刺激的外周全血中单核细胞表面TLR4蛋白表达水平的差异化影响。结果:本研究在280例脓毒症病例和224例正常对照样本中,对TLR4基因所在区域的15个tag SNP进行了基因型分析。所有15个SNP均分型成功,其中SNP rs10983744的基因型频率分布不符合Hardy-Weinberg平衡定律。经遗传关联分析,发现位于TLR4基因3’非翻译区的rs11536889 SNP与性别存在交互作用,与脓毒症的严重程度密切相关。按男女性别进行样本分层分析,在男性群体中,携带CC基因型的患者更容易发生休克(在隐性遗传模式下:GG+GC vs.CC,OR=9.36,95%CI=1.26-69.83),并最终导致多器官功能障碍(在隐性遗传模式下:GG+GC vs.CC,OR=19.10,95%CI=2.31-157.66)。功能意义的研究上,利用不同浓度LPS体外刺激全血1-4h后,单核细胞表面CD14蛋白上升、IL-6R下降,且在1小时达到峰值(CD14)和谷底(IL-6R),而单核细胞TLR4蛋白水平变化不明显(下降趋势没有达到统计学意义),但个体水平间标准差较大。1μg LPS刺激下1h,在对照组和刺激组单核细胞,TLR4 CC、CG、GG三种基因型单核细胞表面TLR4的蛋白表达水平不同,但差异无统计学意义(p0.05)。LPS刺激组不同基因型的单核细胞表面蛋白表达改变?TLR4LPS(TLR4LPS1h-TLR4LPS0h)变化显著,CC基因型个体外周血单核细胞TLR4表达的降低幅度明显低于基因型GC和GG的个体的降低幅度(降低幅度荧光强度差值分别为19.2±10.7、45.9±22.2、50.3±20.1,p0.05),而对照组不同基因型单核细胞表达改变?TLR4baseline(TLR4baseline1h-TLR4baseline0h)无明显变化(降低幅度荧光强度差值分别为12.8±9.1、8.6±4.9、9.9±6.0,p0.05)。结论:本研究结果显示:1.在中国人群中TLR4基因rs11536889位点可能与男性脓毒症病人的严重程度相关;2.LPS刺激下携带不同基因型的个体单核细胞表面TLR4蛋白下降幅度存在明显差异,CC基因型的个体下降幅度明显低于其他两种基因型的个体,提示CC型个体对自身TLR4水平的负反馈调控能力减弱,容易造成单核细胞表面TLR4蛋白水平相对较高,不能有效调低炎症反应,从而引发过度性炎症反应,诱发更严重的脓毒症并发症。
【关键词】：TLR4 基因多态性 脓毒症 单核苷酸多态性 LPS 交互作用
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 主要缩略词对照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 引言12-14
• 第一部分：TLR4基因多态性与脓毒症易感性和严重程度的关联研究14-39
• 1 背景与目的14
• 2 方法和资料14-26
• 3 结果26-38
• 4 讨论38-39
• 第二部分：TLR4基因rs11536889多态位点的功能初探39-60
• 1 背景与目的39
• 2 方法和材料39-47
• 3 结果47-59
• 4 讨论59-60
• 全文总结60-61
• 参考文献61-66
• 个人简历66-67
• 致谢67-68
• 综述68-85
• 参考文献76-85

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本文编号：368176