多个候选基因启动子区域DNA甲基化与肺癌的相关性研究

发布时间：2022-10-30 10:16

　　目的:肺癌是世界范围导致最多人数死亡的癌症,相关治疗和诊断近年虽有所改善,但五年生存率依然不高。启动子CpG岛甲基化是基因表达调控的重要机制之一,肿瘤相关基因启动子甲基化可影响其表达,一方面影响肿瘤生物学行为,另一方面也可能成为肿瘤的相关诊断标志。本课题通过数据库和文献对肺癌相关候选基因进行筛选,然后对这些基因的启动子DNA甲基化情况进行分析和验证,探讨与肺癌相关的基因启动子甲基化情况,为探讨肺癌发病机制和寻找潜在肺癌诊断生物标志物提供实验依据。方法:采用特异性定量甲基化PCR（qMSP）对非小细胞肺癌的癌组织、癌旁组织和远端癌旁组织样本进行肺癌相关基因启动子甲基化水平的测试。并且结合TCGA数据库的数据进行相关阳性基因启动子甲基化的分析。以甲基化参考百分比（PMR）作为甲基化水平衡量标准。采用非参数秩和检验对三组样本进行各基因启动子甲基化水平检测。最后对筛查的三个阳性基因进行相关细胞功能验证,通过荧光素酶实验检测启动子活性,采用5’-aza-deoxycytidine处理肺癌细胞系,检测启动子去甲基化对阳性基因表达水平的影响。结果:1、对肺癌相关基因进行甲基化引物检测后,确定了22个... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
材料与方法
    1.实验材料
        1.1 样本收集及细胞株
        1.2 实验器材
        1.3 主要试剂
    2.实验方法
        2.1 样本收集与处理
        2.2 样本甲基化处理、检测和统计分析
        2.3 细胞复苏、培养、传代和冻存
        2.4 细胞转染
        2.5 荧光素酶报告基因检测
        2.6 5 ’-aza-deoxycytidine去甲基化处理
        2.7 荧光定量PCR
        2.8 生物信息分析
        2.9 数据统计与分析
实验结果
    3.1 多个肺癌候选基因的筛选与基因甲基化检测
    3.2 TNFRSF10C基因组间甲基化水平分析和TCGA数据库分析
    3.3 PRKCDBP基因组间甲基化水平分析和TCGA数据库分析
    3.4 EPAS1 基因组间甲基化水平分析和TCGA数据库分析
    3.5 TNFRSF10C、PRKCDBP和 EPAS1 细胞功能实验
讨论
    1.TNFRSF10C甲基化与肺癌
    2.PRKCDBP甲基化与肺癌
    3.EPAS1 甲基化与肺癌
参考文献
DNA甲基化与肺癌临床诊断的研究进展
    参考文献
致谢



本文编号：3698702