miR-181a-5p靶向LRRFIP1基因介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应

发布时间：2023-01-14 15:25

　　目的:探讨微小RNA-181a-5p（miR-181a-5p）靶向富含亮氨酸的重复失速相互作用蛋白1(LRRFIP1基因介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应的分子机制。方法:体外培养小鼠肾小球系膜细胞SV40MES13,30 mmol/L高糖处理肾小球系膜细胞建立细胞损伤模型。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测miR-181a-5p、LRRFIP1的表达量。分别将miR-181a-5p mimics、miR-NC、si-LRRFIP1、siNC、pcDNA-LRRFIP1与miR-181a-5p mimics、pcDNA-NC与miR-181a-5p mimics转染至肾小球系膜细胞,使用含有30 mmol/L高糖培养基培养细胞。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶实验检测miR-181a-5p过表达对野生型和突变型LRRFIP1荧光素酶活性的影响; Western blot检测活化的含半胱... 

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料与试剂
    2 方法
        2.1 实验分组
        2.2 实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测细胞中miR-181a-5p、LRRFIP1 mRNA的表达水平
        2.3 ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平
        2.4 流式细胞术检测细胞凋亡率
        2.5 双荧光素酶报告基因检测miR-181a-5p的靶基因
        2.6 Western
    3 统计学方法
结果
    1 HG对肾小球系膜细胞miR-181a-5p和LRRFIP1表达的影响与NC组相比，HG组肾小球系膜细胞中miR-181a-5p的表达水平显著降低(P<0.05),LRRFIP1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05)。见图1，表2。
    2过表达miR-181a-5p对HG介导的肾小球系膜细胞SV40 MES 13凋亡和炎症因子释放的影响
    3 低表达LRRFIP1对HG介导的肾小球系膜细胞凋亡和炎症因子释放的影响
    4 miR-181a-5p靶向LRRFIP1
    5 高表达LRRFIP1可以逆转对HG介导肾小球系膜细胞凋亡和炎症因子释放的影响
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]敲低高迁移率族蛋白B1（HMGB1）抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖并促进其凋亡[J]. 李佳,庄乙君,李军,陈文.  细胞与分子免疫学杂志. 2019(06)
[2]糖肾清2号提取物调控AMPK信号通路对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响[J]. 张笑栩,何毓玺,王洁,王达利,杨蕾,张正菊,相瑞阳,张承承,白华,孟凤仙.  中华中医药学刊. 2019(04)
[3]敲低微小RNA-377表达可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖及炎性反应[J]. 杨光,黎小燕,吴乙偲,钟树妹.  中华肾脏病杂志. 2018 (06)



本文编号：3730683