拟穴青蟹MF合成通路基因的克隆及表达分析和保幼激素酸甲基转移酶的蛋白表达分析

发布时间：2023-03-06 19:24

　　拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国比较受欢迎的海产蟹类之一。所以,研究者对于青蟹的关注日益增加,尤其是对于人工养殖和育苗过程中面临的问题,主要是关于养殖规模小、膏蟹产量低、性早熟、溞状幼体到仔蟹培育时死亡率高、病害等。甲壳类内分泌学方面的研究对于这些问题的解决具有重要的指导意义。甲基法尼酯(Methyl farnesoate,MF)是调节拟穴青蟹生长发育和繁殖过程中重要的内分泌激素之一,由大颚器(Mandibular organ,MO)合成和分泌,在青蟹性成熟和幼体变态发育中起着至关重要的作用。本论文以拟穴青蟹内分泌激素MF为主线,借助RACE技术克隆获得拟穴青蟹MF合成过程中的几个关键调控基因,同时采用实时荧光定量PCR技术对其不同幼体发育时期、不同卵巢分期及不同组织的表达模式进行分析,探讨这些基因在个体发育过程中的作用,并对保幼激素酸甲基转移酶(juvenile hormone acid methyl transferase,JHAMT)的蛋白表达进行分析,为解决拟穴青蟹人工养殖和育苗中出现的问题提供参考理论基础。获得的主要研究成果如下:1.拟穴青蟹FPPS、...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 甲壳动物中甲基法尼酯的介绍
    1.2 MF的合成过程
    1.3 MF合成的调控
        1.3.1 眼柄的调控
        1.3.2 神经肽的调控
        1.3.3 信号转导的调控
        1.3.4 MF的作用机制
    1.4 甲基法尼酯的降解过程
    1.5 甲基法尼酯的功能
        1.5.1 调控甲壳类的蜕皮生长
        1.5.2 调控甲壳类的性腺发育
    1.6 JHAMT的研究进展
    1.7 甲基转移酶的简介
        1.7.1 甲基转移酶的功能
        1.7.2 甲基转移酶的分类
    1.8 本研究的意义和目的
第二章 拟穴青蟹MF合成通路基因的克隆和表达分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
    2.2 实验结果
        2.2.1 拟穴青蟹的FPPS基因的克隆及表达分析
        2.2.2 Sp-FoD基因的克隆和表达分析
        2.2.3 Sp-FaD基因的克隆和表达分析
    2.3 讨论
第三章 拟穴青蟹JHAMT基因的蛋白表达分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 Sp-JHAMT的生物学信息
        3.2.2 Sp-JHAMT基因PCR扩增产物
        3.2.3 pET28a载体双酶切
        3.2.4 重组质粒菌落PCR验证和双酶切鉴定
        3.2.5 重组蛋白表达分析
        3.2.6 重组蛋白纯化
    3.3 讨论
第四章 小结
    4.1 研究总结
    4.2 本文创新点
参考文献
附录
附件
致谢



本文编号：3757238