应用RGS双荧光替代性报告载体提高CRISPR/Cas9对猪BMP15基因的打靶效率

发布时间：2023-03-06 20:03

　　我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体...

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 RGS双荧光替代性报告载体工作原理
        1.2.2 靶向BMP15基因的CRISPR/Cas9表达载体构建
        1.2.3 筛选BMP15基因编辑细胞的RGS双荧光替代性报告载体的构建
        1.2.4 PEF细胞的培养与转染
        1.2.5 T7E1实验
2 结果与分析
    2.1 RGS双荧光替代性报告载体转染PEF细胞
    2.2 CRISPR/Cas9表达载体与RGS双荧光替代性报告载体共转染PEF细胞
    2.3 T7E1酶切鉴定结果
3 讨论



本文编号：3757294