A型流感病毒H7N9株PA和PAX基因的克隆和真核表达

发布时间：2023-04-14 17:58

　　本试验旨在克隆A型流感病毒H7N9株的PA和PAX基因并构建真核表达载体对其进行真核表达。从苏州分离株的鸡胚尿囊液中提取禽流感病毒RNA,通过RT-PCR技术获取PA以及PAX全长基因,经琼脂糖凝胶电泳获得纯化的目的基因;构建目的基因重组真核表达质粒,并利用双酶切及测序鉴定重组质粒;质粒DNA转染293T细胞真核表达,让其表达的蛋白产物通过Western Blot鉴定。其结果成功地在293T细胞内表达了PA与PAX蛋白,为进一步研究A型流感病毒PA与PAX蛋白的功能奠定了基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒毒株、质粒及细胞
    1.2 主要试剂
    1.3 引物设计
    1.4 总R NA提取和R T-PCR扩增
    1.5 PA基因和PAX基因重组克隆质粒的构建
    1.6 真核表达载体的构建
    1.7 基因转染
    1.8 Western Blot鉴定
2 结果
    2.1 R T-PCR琼脂糖凝胶电泳结果
    2.2 酶切鉴定H7N9毒株PA基因与PAX基因
    2.3 Western Blot蛋白鉴定
3 讨论



本文编号：3790717