RPS6KA2在RNA聚合酶Ⅰ和Ⅲ指导的基因转录中的作用和调节机制

发布时间：2023-04-24 23:57

　　RPS6KA2(ribosomal protein S6 kinase,90kDa,polypeptide 2,RSK3)基因是编码丝氨酸和苏氨酸激酶的RSK(核糖体S6激酶)家族的成员。RPS6KA2激酶含有2个不相同的激酶催化结构域,通过磷酸化不同底物参与细胞生长和细胞分化等多种生理生化活动。本实验室以前的研究结果显示,细丝蛋白A(Filamin A,FLNA)对RNA聚合酶Ⅰ(PolⅠ)和RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)所指导的基因转录具有抑制作用,但其调节机制还不完全清楚。最近mRNA-seq分析表明,在FLNA敲低的SaOS2细胞中RPS6KA2 mRNA表达量显著提高。通过检测不同细胞的FLNA shRNA稳定表达细胞系,进一步确定FLNA能抑制RPS6KA2的表达。以前的研究表明,Ras和ERK参与Pol Ⅰ和Ⅲ介导的基因表达,而RPS6KA2是ERK信号通路中效应子之一.这些信息提示RPS6KA2可能参与PolⅠ和Pol Ⅲ所指导的基因转录调节。为了研究RPS6KA2是否参与了PolⅠ和Pol Ⅲ指导的基因转录,我们通过基因克隆的方法制备了RPS6KA2 shRNA表达载体并...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究意义
    1.2 研究背景与现状
        1.2.1 细丝蛋白A(FLNA)
        1.2.2 p90 核糖体S6 蛋白激酶家族(RSKs)
        1.2.3 RNA聚合酶Ⅰ(polⅠ)和RNA聚合酶Ⅲ(polⅢ)基因转录
    1.3 本课题产生的依据和研究目标
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验所需的细胞和质粒
        2.1.2 实验耗材
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验仪器及设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒构建
        2.2.2 细胞操作实验
        2.2.3 RT-qPCR(实时荧光定量PCR)
        2.2.4 蛋白质印迹法(Western blot,WB)
        2.2.5 细胞增殖实验
    2.3 实验数据处理
第3章 实验结果
    3.1 细胞内FLNA的敲低可增强RPS6KA2 的表达
    3.2 RPS6KA2 SHRNA瞬时敲低能够抑制POLⅠ和POLⅢ指导的基因转录
    3.3 建立RPS6KA2 SHRNA稳定表达细胞系
    3.4 RPS6KA2在POLⅠ和POLⅢ基因转录中起促进作用
    3.5 RPS6KA2 瞬时过表达显著增强部分POLⅠ和POLⅢ基因转录的表达
    3.6 RPS6KA2 稳定过表达细胞系的建立及POLⅠ和POLⅢ基因转录的调节
    3.7 敲低RPS6KA2能抑制细胞的增殖
    3.8 RPS6KA2过表达能促进细胞的增殖
    3.9 RPS6KA2 通过影响RHOA和C-MYC的表达调节POLⅠ和POLⅢ指导的基因转录
第4章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
致谢
参考文献
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目



本文编号：3800285