茶树CsNHX6基因的克

发布时间：2023-05-07 23:40

　　茶树[Camellia sinensis(L.)O.Kuntze]起源于我国,在我国具有悠久的种植历史,由其叶片加工成的“茶”饮品因其独特的风味,受到世界人民的喜爱。然而受到土壤盐渍化影响,茶树适宜生长的土壤环境受到破坏,限制了茶树产量和品质的提升。为阐明茶树响应盐胁迫的分子基础和调控机理,进而为鉴定和选育茶树抗盐品种提供理论参考,本论文进行了以下研究:1.从茶树品种‘龙井长叶’中分离获得了Na⁺/H⁺逆向转运蛋白基因CsNHX6的cDNA全长,其包含一个1587 bp的ORF,编码528个氨基酸。蛋白预测分析结果显示CsNHX6蛋白包含11个跨膜结构域,主要定位于高尔基体中。系统进化分析显示,CsNHX6与葡萄VvNHX6、杨树PtNHX2等同源性较高,聚为一支均属于NHX Class-II亚家族成员,而与AtNHX1、AtNHX2等Class-I亚家族成员同源性较低。qRT-PCR分析表明,CsNHX6基因表达具有一定的组织特异性,在花器官中表达最高,而在茎中表达最低。200 mM Na⁺和100 mM K^...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 盐分对植物的危害
        1.1.1 渗透胁迫
        1.1.2 离子胁迫
        1.1.3 氧化胁迫
    1.2 植物对盐胁迫的响应机制
        1.2.1 渗透调节
        1.2.2 抗氧化系统
        1.2.3 维持Na⁺/K⁺平衡
        1.2.4 基因的转录调节
        1.2.5 MicroRNA在盐胁迫中的作用
    1.3 茶树耐盐机制研究进展
    1.4 研究的目的及意义
第二章 茶树CsNHX6 基因的克隆及表达模式分析
    2.1 试验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和载体
        2.1.3 试剂
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 植物材料培养与胁迫处理
        2.2.2 总RNA的提取
        2.2.3 cDNA第一链的合成
        2.2.4 茶树CsNHX6 基因的克隆
        2.2.5 CsNHX6 基因序列的生物信息学分析
        2.2.6 实时荧光定量PCR
    2.3 结果与分析
        2.3.1 茶树CsNHX6 基因的克隆
        2.3.2 茶树CsNHX6 蛋白的生物信息学分析
        2.3.3 茶树CsNHX6 基因表达模式分析
    2.4 讨论
第三章 茶树CsNHX6 基因在酵母中的功能验证
    3.1 试验材料
        3.1.1 载体和菌株
        3.1.2 试剂
        3.1.3 主要仪器设备
    3.2 试验方法
        3.2.1 酵母表达载体构建
        3.2.2 酵母转化
        3.2.3 酵母菌液PCR鉴定
        3.2.4 酵母功能互补
        3.2.5 酵母细胞离子含量检测
        3.2.6 CsNHX6 蛋白关键氨基酸位点突变分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 酵母表达载体的构建
        3.3.2 转基因酵母检测
        3.3.3 转基因酵母功能回补分析
        3.3.4 转基因酵母离子含量检测
        3.3.5 pH对 CsNHX6 在酵母中回补功能的影响
        3.3.6 CsNHX6 定点突变及二级结构预测
        3.3.7 CsNHX6 突变体的酵母功能回补分析
    3.4 讨论
第四章 CsNHX6 基因在拟南芥中的遗传转化及功能验证
    4.1 试验材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 载体与菌株
        4.1.3 试剂
        4.1.4 主要仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 拟南芥种植
        4.2.2 过表达载体构
        4.2.3 农杆菌感受态制备
        4.2.4 农杆菌转化
        4.2.5 拟南芥侵染
        4.2.6 转基因阳性苗筛选
        4.2.7 转基因拟南芥PCR鉴定
        4.2.8 转基因拟南芥表达水平分析
        4.2.9 转基因拟南芥耐盐性功能验证
    4.3 结果与分析
        4.3.1 过表达载体构建
        4.3.2 农杆菌菌液PCR验证
        4.3.3 抗性植株的获得与鉴定
        4.3.4 转基因拟南芥表达水平分析
    4.4 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3811557