肾癌786-O细胞B4GALNT1基因RNA干扰模型构建与鉴定

发布时间：2023-05-12 20:22

　　目的构建靶向抑制β-1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(B4GALNT1)基因表达的shRNA慢病毒载体,稳定转染至人肾癌细胞株786-O中,观察转染后抑制效率及对786-O细胞增殖活性的影响。方法构建特异性靶向抑制B4GALNT1基因表达的shRNA慢病毒载体(shB4GALNT1),通过琼脂糖凝胶电泳和阳性克隆测序鉴定载体的构建;慢病毒包装并稳定转染至肾癌786-O细胞中,通过荧光显微镜观察shRNA转染细胞;实验分为3组:空白对照(NC)组、转染空载体(VC)组和转染shB4GALNT1(KD)组,分别通过Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应来证实转染shB4GALNT1在蛋白与mRNA表达水平的抑制效率;通过Celigo全视野细胞扫描分析抑制B4GALNT1表达对786-O细胞增殖活性的影响。结果琼脂糖凝胶电泳证实阳性克隆为341bp,阳性克隆测序证实B4GALNT1shRNA慢病毒表达载体构建成功;绿色荧光蛋白表达证实B4GALNT1shRNA慢病毒表达载体转染至肾癌786-O细胞中;NC组、VC组和KD组B4GALNT1蛋白的相对表达量分别为1.013±0.0...

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【文章目录】：
材料与方法
    一、材料与试剂
    二、方法
结果
    一、B4GALNT1shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定
    二、B4GALNT1shRNA慢病毒载体的包装和转染786-O细胞株
    三、鉴定稳定转染B4GALNT1shRNA的786-O细胞建立
    四、抑制B4GALNT1表达对786-O细胞增殖活性的影响
讨论



本文编号：3814571