鲤疱疹病毒3型vIL-10基因的克隆表达及其对免疫相关因子调节作用的研究

发布时间：2023-10-04 00:41

　　白介素10(Interleukin-10,IL-10)是一种多功能的细胞因子,同时具有免疫增强和免疫抑制作用,但其主要作用是免疫抑制。有些病毒在感染宿主时,通过上调宿主IL-10的表达或编码IL-10类似物,即病毒IL-10(Viral interleukin-10,vIL-10),逃避宿主的免疫监视和清除,以建立持续性感染。鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus3,CyHV-3)是目前已知能编码vIL-10的少数低等脊椎动物病毒之一。本论文对CyHV-3 vIL-10基因进行了克隆表达,随后用获得的重组vIL-10(Recombinant viral interleukin-10,rvIL-10)蛋白刺激鲤鱼头肾巨噬细胞和鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprini,EPC),利用荧光定量PCR、Tunel染色和流式细胞术,检测免疫相关因子的表达、凋亡相关因子的表达和细胞凋亡率,探讨CyHV-3 vIL-10对免疫相关因子表达的影响和对EPC细胞凋亡的影响。生物信息学分析结果显示,CyHV-3 vIL-10由179个氨基酸组成,含有一个...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
    1 白介素10的研究进展
        1.1 IL-10 来源
        1.2 IL-10 家族
        1.3 IL-10 受体
        1.4 IL-10 的生物学活性
        1.5 IL-10 抑制细胞凋亡
        1.6 鲤鱼IL-10
    2 病毒白细胞介素10的研究进展
        2.1 vIL-10 基因结构
        2.2 vIL-10 的蛋白结构
        2.3 vIL-10 的转录表达
        2.4 vIL-10 在体外的生物学活性
        2.5 vIL-10 在体内的生物学活性
        2.6 vIL-10 的应用研究
    3 鲤疱疹病毒3型的研究进展
        3.1 病毒的基因组及蛋白质组特征
        3.2 KHVD的流行病学
        3.3 CyHV-3 编码的细胞因子及细胞因子受体
    4 本研究的目的和意义
第二章 鲤疱疹病毒3型vIL-10 基因的克隆表达及生物信息学分析
    1 实验材料
        1.1 实验细胞及病毒株
        1.2 主要实验试剂
        1.3 主要实验设备
    2 实验方法
        2.1 CyHV-3 vIL-10 基因的克隆
        2.2 生物信息学分析
        2.3 CyHV-3 vIL-10 去信号肽基因的克隆
        2.4 CyHV-3 vIL-10 去信号肽基因的表达
    3 实验结果
        3.1 CyHV-3 vIL-10 基因的扩增、克隆及鉴定
        3.2 CyHV-3 vIL-10 的生物信息学分析
        3.3 CyHV-3 vIL-10 去信号肽基因的扩增、克隆及鉴定
        3.4 CyHV-3 vIL-10 原核表达载体构建及鉴定
        3.5 rvIL-10 蛋白的诱导表达
        3.6 rvIL-10 蛋白诱导表达的条件优化
        3.7 rvIL-10 蛋白的纯化及特异性检测
    4 讨论
    5 小结
第三章 rvIL-10 蛋白对宿主免疫相关因子的调节作用研究
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验的重组蛋白
        1.3 主要实验试剂
        1.4 主要实验设备
    2 实验方法
        2.1 鲤鱼头肾巨噬细胞的分离
        2.2 rvIL-10 蛋白对鲤鱼头肾巨噬细胞的刺激
        2.3 细胞总RNA的提取和c DNA的合成
        2.4 荧光定量PCR检测免疫相关因子的表达
        2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 rvIL-10 蛋白对免疫相关因子表达的影响
        3.2 rvIL-10 蛋白对LPS诱导的免疫相关因子表达的影响
        3.3 rvIL-10 蛋白在不同时间对免疫相关因子表达的影响
        3.4 rvIL-10 蛋白在不同时间对LPS诱导的免疫相关因子表达的影响
    4 讨论
    5 小结
第四章 rvIL-10 蛋白拮抗鲤鱼上皮瘤细胞凋亡的初步研究
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验的重组蛋白
        1.3 主要实验试剂
        1.4 主要实验设备
    2 实验方法
        2.1 rvIL-10 蛋白对EPC细胞的刺激
        2.2 Tunel染色检测EPC细胞凋亡
        2.3 流式细胞术检测EPC细胞凋亡
        2.4 荧光定量PCR检测细胞中凋亡相关基因的表达
        2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 Tunel染色检测rvIL-10 蛋白对EPC细胞凋亡的影响
        3.2 流式细胞术检测rvIL-10 蛋白对EPC细胞凋亡的影响
        3.3 rvIL-10 蛋白对凋亡相关基因表达的调节
    4 讨论
    5 小结
第五章 结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3850973