TGF β RⅡ基因在EML4-ALK融合基因肺腺癌中的表达水平及其对肺腺癌H3122细胞生物学行为的影响

发布时间：2023-10-18 20:04

　　背景:目前,在中国肺癌是发病率和死亡率位居第一的恶性肿瘤。针对晚期的非小细胞肺癌(NSCLC)治疗,分子靶向治疗成为研究热点,其中以EML4-ALK融合基为靶点的靶向治疗尤其备受关注。另外,众多科学家研究发现一种新的抑癌基因TGFβRII。大量研究表明,TGFβRII与多数恶性肿瘤发生发展密切相关,有研究发现,TGFβRII在肠癌、头颈癌等恶性肿瘤中表达异常增高,但也有研究发现TGFβRII在胃癌、结直肠癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌、宫颈癌等癌症中异常降低并促进癌症发展。TGFβRII是TGF-β蛋白主要结合受体蛋白,在细胞增殖过程中发挥重要作用,可进一步使TGFβR1磷酸化激活TGFβR1上下游相关通路,调节机体细胞正常生长凋亡。当TGFβ信号通路异常,机体内发生多种癌症危险性将大大升高。TGFβRII基因表达异常在直接影响TGFβ信号通路失调之外,还可影响Smad等信号通路、Smad信号通路在细胞内发挥重要的调节DNA转录功能,一旦受到影响,将激活或抑制某些基因表达从而影响细胞增殖凋亡。除此之外,TGFβRII作用可能还与Ras信号通路有关。研究发现,Ras信号通路可能介导TGFβRI...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 不同分期EML4-ALK融合基因阳性NSCLC患者中TGF β RⅡ表达
    1、实验材料
        1.1 .研究对象
        1.2 实验试剂与耗材
    2、实验方法
        2.1 肺腺癌石蜡组织样本免疫组织化学检测
        2.2 肺腺癌石蜡组织样本实时荧光定量PCR(QPCR)检测ALKMRNA表达
            2.2.1 引物设计与合成
            2.2.2 RNA提取
            2.2.3 反转录
            2.2.4 定时定量PCR
        2.3 肺腺癌石蜡组织样本逆转录PCR(RT-PCR)检测TGFβRIImRNA表达
            2.3.1 石蜡组织样本总RNA提取
            2.3.2 引物设计与合成
            2.3.3 逆转录反应
            2.3.4 RT-PCR反应
    3、统计学分析
    4、实验结果
        4.1 患者基本情况
        4.2 RT-qPCR检测EML4-ALK结果
        4.3 EML4-ALK 融合蛋白表达结果
        4.4 TGFβRIImRNA在不同分期ALK阳性NSCLC患者中表达
            4.4.1 IA期和IIIA期EML4-ALK阳性肺腺癌患者临床病理特征
            4.4.2 IA期和IIIA期EML4-ALK阳性肺腺癌临床石蜡组织样本中TGFβRIImRNA表达
    5、讨论
第二章 TGFΒRⅡ对肺腺癌H3122细胞侵袭行为的影响
    1、实验材料
        1.1 .研究对象
        1.2 实验试剂与耗材
    2、实验方法
        2.1 DNA胶回收
        2.2 质粒提取
        2.3 细胞培养
        2.4 细胞基因组DNA提取
        2.5 实时荧光定量PCR
        2.6 载体构建
            2.6.1 TGFβRⅡ干扰载体构建
        2.7 慢病毒包装
            2.7.1 细胞转染
            2.7.2 慢病毒感染及稳定株筛选
        2.8 细胞迁移实验
        2.9 Transwell细胞侵袭
        2.10 细胞增殖实验
        2.11 克唑替尼药物抑制实验
    3、统计学分析
    4、实验结果
        4.1 TGFβRⅡshRNA转染效率
        4.2 细胞迁移实验结果
        4.3 细胞侵袭实验结果
        4.4 细胞增殖实验结果
        4.5 克唑替尼药物抑制实验
    5、讨论
结论
参考文献
综述
    1.EML4-ALK阳性NSCLC研究进展
        1.1 EML4-ALK基因融合在NSCLC疾病中的临床现状
        1.2 EML4-ALK阳性NSCLC患者治疗进展
    2.TGFβ在EML4-ALK基因融合型NSCLC患者中的研究进展
        2.1 TGFβ在NSCLC患者中的诊断研究
        2.2 IGF-β在NSCLC患者治疗过程中获得性耐药的作用
        2.3 TGFβ在EML4-ALK阳性NSCLC患者中抗耐药性研究
    参考文献
攻读期间的研究成果
致谢



本文编号：3855108