基于连接反应及环介导等温扩增技术的结直肠癌KRAS基因突变检测新方法研究

发布时间：2023-11-11 18:43

　　目的:本文拟以连接反应和环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)为基础,构建基于连接反应的环介导等温扩增新方法,实现KRAS基因突变的高灵敏、高特异性检测。方法:本研究首先对本方法的可行性进行了验证。研究中突变KRAS DNA(mutant DNA,mut DNA)能够与连接底物SLS1和SLS2互补配对,在连接酶的作用下,特异地连接而形成哑铃状结构(dumbbell-shaped structure,DSS)模板,从而启动下一步LAMP的扩增反应,产生大量长短不一的DNA双链,这时荧光染料SYBR Green I镶嵌到产生的DNA双链中产生明显的荧光信号。而与mut DNA相比,野生型KRAS DNA(wild-type DNA,wt DNA)与SLS2之间多了一个错配碱基,导致连接反应不能进行,不能进行后续的LAMP放大,产生微弱的荧光信号,由此对mut DNA和wt DNA进行区分。在明确方案可行后,对实验中的错配位点、连接温度、连接循环次数、Bst DNA聚合酶浓度和LAMP温度进行了优化,然后在最优实验条件下...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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中文摘要
英文摘要
前言
    技术路线
实验材料
实验方法
结果
讨论
结论
参考文献
综述 环介导等温扩增技术的基本原理及其在电化学生物传感器上的应用
    参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3863104