猪DDX21基因的克

发布时间：2024-03-30 06:29

　　DEAD-box解旋酶21(DEx D-box helicase 21,DDX21)是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成员之一,不仅参与RNA的合成和加工过程,同时还参与机体的天然免疫应答,调控病毒的复制。为了研究猪DDX21基因的结构和功能,以猪肾传代细胞(PK-15)总cDNA为模板,根据GenBank公布的预测序列(XM₀05657387.2)设计引物扩增猪源DDX21基因,并采用分子生物学软件将其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,首次成功克隆了猪DDX21基因的cDNA序列(GenBank登录号为KX396051),其开放读码框全长为2 355 bp,编码784个氨基酸;与牛、斑马鱼、人、小鼠、大鼠和非洲爪蟾的氨基酸序列同源性分别为91.7%,57.5%,88.0%,82.3%,83.8%和48.9%;该基因编码的蛋白结构域和人、牛、小鼠、大鼠一样,其C端都具有保守的GUCT结构域;系统进化树分析表明猪DDX21与牛DDX21的亲缘关系最近。进一步构建原核表达质粒p ET28a-DDX21,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 菌株、载体和细胞系
    1.2 主要试剂
    1.3 引物设计及合成
    1.4 猪DDX21基因的克隆
    1.5 猪DDX21基因序列分析、同源性比对及构建进化树
    1.6 原核表达载体p ET28a-DDX21的构建
    1.7 p ET28a-DDX21的诱导表达
2 结果与分析
    2.1 猪DDX21基因的克隆
    2.2 猪DDX21基因的氨基酸序列分析及同源进化树构建
    2.3 猪DDX21基因原核表达载体的构建及鉴定
    2.4 DDX21基因重组蛋白的诱导表达
3 讨论和结论



本文编号：3941947