细胞衰老过程中POLD1基因表达下调的甲基化调控机制

发布时间：2024-04-27 03:17

　　目的探讨人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)衰老过程中POLD1基因表达下降的甲基化调控机制。方法按传代情况将2BS分为年轻细胞组(25PD)、衰老细胞组(55PD)。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测2BS衰老过程中POLD1 mRNA和蛋白表达水平的变化,利用亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)分析2BS衰老过程中POLD1基因启动子区甲基化状态的变化,应用甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dc)处理2BS(48PD),RT-PCR检测处理前后POLD1 mRNA表达变化,分析2BS衰老过程中POLD1基因甲基化及去甲基化对POLD1 mRNA表达的影响及二者之间的关系。结果与年轻细胞组比较,衰老细胞组POLD1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),POLD1启动子区甲基化水平显著增高(P<0.01),且POLD1 mRNA表达水平与其启动子区甲基化水平呈负相关(n=6,r²=0.853,P=0.009);经5-Aza-dc处理后,POLD1 mRNA表达水平增高(P&...

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图1不同代龄2BSPOLD1mRNA表达水平

表2BSP相关引物信息CpG岛引物序列(5′→3′)长度(bp)1正向引物1-1:TGAGTTTAATTTACGTATAGGG反向引物1-1:GTACGCCAACACAGTGCTGTC正向引物2-1:GAGAATAGATTAAGTTAGGATTTTAT反向引物2-1....

图2不同代龄2BSPOLD1蛋白表达水平

图1不同代龄2BSPOLD1mRNA表达水平图3不同代龄2BSPOLD1启动子区甲基化水平

图3不同代龄2BSPOLD1启动子区甲基化水平

图2不同代龄2BSPOLD1蛋白表达水平4.POLD1mRNA表达与启动子甲基化的关系:分析年轻和衰老2BSPOLD1mRNA表达水平和其启动子甲基化水平相关性(图4)。POLD1启动子区甲基化水平与其mRNA表达水平呈负相关(n=6,r2=0.853,P=0.009....

图4POLD1启动子区甲基化水平与其mRNA表达水平的相关性分析

POLD1是DNA复制和损伤修复中最重要的基因之一,位于第19号染色体q13.3-q13.4上,其cDNA全长约3.5kb,编码1107个氨基酸[6]。POLD1基因缺陷不仅与肿瘤关系密切,也增加早老综合征如沃纳综合征(Wernersyndrome)的发生风险[8～11]。此外....

本文编号：3965275