CRISPR/Cas9介导的β4GalNT2基因敲除猪制备

发布时间：2024-05-12 23:01

　　猪(Sus scrofa)β1,4 N-乙酰半乳糖胺转移酶(β1,4 N-acetylgalactosaminyl transferase,β4GalNT2)及其产物是引起异种移植排斥反应的重要非半乳糖(Gal)抗原之一。为了进一步降低异种移植排斥反应,本研究在α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)敲除的巴马小型猪基础上,利用规律成簇间隔短回文重复/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)技术制备β4GalNT2基因敲除猪。首先设计靶向猪β4GalNT2基因的单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA),构建sgRNA表达载体,将其电转染GGTA1基因敲除猪耳成纤维细胞,进行单细胞培养,采用PCR、TA克隆及测序的方法鉴定单细胞克隆的突变类型。选择β4GalNT2基因突变的单细胞克隆为核供体,通过体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术制备β...

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图12Westernblot鉴定克隆点中hCD55蛋白表达Figure12Theidentificationofwesternblot725570hCD55

本文编号：3972021