抗CD20单克隆抗体与IL-10基因联合干预对NOD鼠胰岛β细胞再生作用及机制研究

发布时间：2024-06-02 21:01

　　1型糖尿病(Type 1 diabetes mellitus,T1D)是一种以胰岛β细胞进行性损伤、内源性胰岛素分泌绝对不足为主要表现的自身免疫性疾病。目前,胰岛素注射仍是治疗本病的主要措施。但是,注射胰岛素并不能阻止胰岛β细胞的凋亡过程,脆性糖尿病仍严重影响着患者的生活质量。研究表明,即便是T1D患者,体内仍存在残存的胰岛β细胞,且这部分β细胞仍具有自我复制和再生的能力^[1]。因此,保护这部分残存胰岛β细胞的功能,研究促进其再生机制,对减少T1D急、慢性并发症及脆性糖尿病的发生具有十分重要的意义。研究发现,Th1/Th2细胞亚群失衡和B淋巴细胞的过渡激活是导致1型糖尿病发生的重要免疫机制^[2-4]。IL-10是Th2细胞分泌的重要细胞因子,本实验成功构建携有鼠IL-10基因的腺病毒载体,并证实补充外源性IL-10基因使其在小鼠体内持续高表达,可以纠正失衡的Th细胞亚群比例^[5]。CD20是B淋巴细胞表面重要的细胞分子,抗CD20单克隆抗体特异性与CD20结合,可以介导B淋巴细胞的凋亡^[6]。本实验...

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【学位级别】：博士

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摘要
abstract
缩略词索引表
引言
第一章 材料与方法
    1.1 主要仪器
    1.2 主要试剂及耗材
    1.3 方法
        1.3.1 重组腺病毒包装的细胞准备
        1.3.2 包装重组腺病毒
        1.3.3 重组腺病毒的富集、扩增与滴度测定
        1.3.4 重组实验动物分组、处理及标本采集
            1.3.4.1 动物分组
            1.3.4.2 动物处理及标本采集
        1.3.5 NOD 鼠血糖、体重及基本生命体征的监测
        1.3.6 HE 染色评价胰岛炎症情况
        1.3.7 ELISA
        1.3.8 免疫组化和免疫荧光
        1.3.9 RT-PCR
        1.3.10 Real-Time PCR
        1.3.11 Western blot
        1.3.12 SDS-PAGE 电泳
        1.3.13 免疫印迹
        1.3.14 统计学处理
第二章 结果
    2.1 扩增腺病毒获得高滴度病毒原液
    2.2
        2.2.1 各组NOD鼠体重在治疗前后无明显差异
        2.2.2 NOD鼠血糖在联合治疗组较低
    2.3 HE染色提示联合治疗组胰腺炎症较轻
    2.4 血清IL-10 含量在IL-10 单独治疗组最高
    2.5 免疫组化
    2.6 免疫荧光示Pdx-1 和胰岛素在联合治疗组高表达
    2.7 RT-PCR示胰岛β细胞分化关键基因在联合治疗组高表达
    2.8 Western blot示 Pdx-1、Pax-4、Nkx6、Mafa蛋白在联合治疗组高表达
第三章 讨论
第四章 结论
参考文献
综述 1型糖尿病胰岛β细胞损伤机制及再生相关研究进展
    一、T1D发病机制研究展
        1.B 细胞与T1D
        2.T 细胞与T1D
        3.NK细胞与T1D
        4.单核-巨噬细胞与T1D
        5.树突状细胞与T1D
    二、胰岛β细胞的转化与再生
    综述参考文献
在读期间发表论文情况
致谢



本文编号：3987775