诱导性Rbm24基因敲除小鼠的构建与鉴定

发布时间：2024-10-30 22:40

　　RNA结合蛋白通过调控选择性剪接、mRNA的稳定性等方式对于转录后调控起重要作用。Rbm24(RNA-Binding protein24)是RNA结合蛋白家族成员之一,在不同物种中序列高度保守,并在心脏、骨骼肌等组织中高表达。研究发现,Rbm24在心脏、骨骼肌的分化发育过程中起到重要作用,近年来,随着研究的不断深入,发现Rbm24在其他组织器官及疾病中也可能具有重要功能。构建Rbm24基因敲除小鼠模型可对Rbm24的功能进行更深入的研究。但Rbm24基因敲除小鼠具有胚胎致死性,为进一步研究Rbm24在成体小鼠的组织器官与疾病中的作用,实现Rbm24时空特异性敲除,我们利用Cre-loxP敲除系统构建Tamoxifen诱导的全身性Rbm24基因敲除小鼠。诱导性Cre-loxP系统可将某个基因在特定时期或特定组织中进行诱导敲除,是基因在特定组织与时期的功能研究的强有力工具。利用同源重组法构建Rbm24loxp/loxp小鼠,与R26CreER小鼠交配,获得F1代双杂合小鼠,F1代小鼠自交获得诱导性全身敲除Rbm24基因的小鼠。通过基因型鉴定选择带有cre与同向loxP/loxP位点的小鼠进行...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 RNA结合蛋白研究进展
        1.1.1 RNA结合蛋白的结构
        1.1.2 RNA结合蛋白功能研究进展
    1.2 Rbm24基因研究进展
        1.2.1 Rbm24基因的结构与分布
        1.2.2 Rbm24基因的功能
    1.3 基因敲除技术概论
        1.3.1 基于位点特异性重组基因敲除技术
        1.3.2 基于同源重组的基因敲除技术
        1.3.3 其他基因敲除技术
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 PCR与Real-time PCR引物
        2.1.3 抗体
    2.2 实验仪器
    2.3 常用试剂耗材
    2.4 实验内容与方法
        2.4.1 基因分型
        2.4.2 组织总RNA提取
        2.4.3 RNA反转录
        2.4.4 荧光实时定量PCR
        2.4.5 组织蛋白的提取
        2.4.6 BCA定量
        2.4.7 蛋白质免疫印迹
        2.4.8 组织固定脱水及石蜡包埋
        2.4.9 石蜡切片、贴片与烤片
        2.4.10 伊红-苏木素染色(HE染色)
        2.4.11 Masson染色
第三章 结果分析
    3.1 Rbm24的表达定量
    3.2 Rbm24^loxP/loxP小鼠的构建
    3.3 诱导全身性Rbm24基因敲除小鼠的构建
    3.4 诱导性Rbm24基因敲除小鼠基因型鉴定
    3.5 蛋白水平鉴定诱导敲除效率
    3.6 Rbm24诱导性基因敲除小鼠外形观察及体重分析
    3.7 诱导敲除Rbm24基因导致小鼠心功能及心脏结构发生改变
        3.7.1 Rbm24敲除后小鼠心功能下降
        3.7.2 Rbm24敲除小鼠心脏形态发生改变
        3.7.3 Rbm24敲除后小鼠心脏出现纤维化
    3.8 诱导敲除Rbm24导致下游基因异常剪接
第四章 总结与讨论
参考文献
致谢



本文编号：4008590