MRTF-A参与一氧化氮诱导的乳腺癌迁移相关基因表达

发布时间：2024-11-30 23:43

　　 为研究NO对乳腺癌细胞迁移能力的影响及其分子机制,本研究首先用梯度浓度NO供体SNP处理乳腺癌细胞MCF-7,MTT法检测细胞活性,发现高浓度SNP抑制细胞增殖;PI-AnnexinV和Hoechst细胞核染色检测结果显示,高浓度NO促进细胞凋亡.用低浓度SNP处理细胞,划痕愈合及小室迁移实验结果显示,低浓度SNP促进细胞迁移;RT-qPCR和Westernblot结果显示,低浓度SNP上调转录调控辅因子MRTF-A及其下游的迁移相关基因MYL9、MYH9和CYR61的表达.在MCF-7细胞敲低NOS2基因同样导致MRTF-A、MYL9、MYH9及CYR61表达下降;敲低MRTF-A则SNP不再促进上述迁移相关基因的表达.以上实验结果提示:NO的肿瘤生物学效应与NO浓度密切相关,细胞内源性或外源性低浓度NO可能通过刺激迁移相关基因表达而促进乳腺癌细胞转移,而MRTF-A参与了NO诱导的迁移相关基因表达.

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【部分图文】：

图1 SNP处理后细胞培养基中NO含量测定

为了确定SNP作为细胞外NO供体的有效性，利用Griess法检测加SNP24h后培养基中NO含量，结果如图1所示．与未加药组相比，不同浓度SNP均可以释放NO，且NO含量随着加入SNP浓度升高而增加，确定了SNP作为NO供体药物的有效性．为观察SNP对MCF-7细胞活性的影响....

图2 SNP对MCF-7细胞增殖的影响

为观察SNP对MCF-7细胞活性的影响，进行MTT实验，结果如图2所示．当SNP浓度低于0.5mmol/L时，对MCF-7细胞活性无显著抑制；但SNP浓度高于0.5mmol/L时，活细胞数量明显下降．这表明高浓度NO抑制MCF-7细胞增殖．2.2高浓度NO对MCF-7细胞凋....

图3 高浓度SNP对MCF-7细胞凋亡的影响

为了进一步确定SNP诱导MCF-7细胞凋亡，采用Hoechst染色观察高浓度SNP对细胞核形态的影响，结果如图4所示．图4Hoechst染色观察细胞核内DNA聚集状态

图4 Hoechst染色观察细胞核内DNA聚集状态

图3高浓度SNP对MCF-7细胞凋亡的影响用1mmol/L或2mmol/LSNP处理后，MCF-7细胞核明显皱缩，DNA在核膜下聚集并出现“冒状”结构，提示细胞凋亡发生．Hoechst染色结果和PI-AnnexinV检测结果一致，证实NO供体SNP浓度高于0.5mmo....

本文编号：4013199