鲤鱼2种脂蛋白脂肪酶基因的cDNA克

发布时间：2017-06-15 21:04

  本文关键词：鲤鱼2种脂蛋白脂肪酶基因的cDNA克隆、表达及其酶活性，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了对鲤鱼(Cyprinus carpio)2种脂蛋白脂肪酶(LPL1、LPL2)基因进行c DNA克隆以及表达和酶活性分析,测定了鲤鱼2种脂蛋白脂肪酶基因的组织表达特征,对这2种基因进行了原核表达,采用对硝基苯酚法比较了2种LPL的酶活性。克隆结果表明,鲤鱼LPL1和LPL2基因的开放阅读框分别为1 524 bp和1 503 bp,分别编码507个和500个氨基酸,氨基酸相似性为45.51%,LPL2氨基酸功能位点由~(83)N突变至~(83)K。实时荧光定量PCR结果表明:LPL1和LPL2均在肝脏中表达量最高,其次在心脏、脂肪、肌肉、脑、肾中,前肠表达量最低,在所有组织(器官)中LPL1的表达量比LPL2高。构建的原核表达载体LPLs-p EASY(E2),经IPTG诱导,在Transetta(DE3)细胞中表达了分子量分别为5.55×10~4、5.35×10~4的融合蛋白LPL1和LPL2。酶活性测定结果表明:LPL1和LPL2酶活性最适温度均为为35℃,最适p H均为8.0。LPL1酶活性高于LPL2,推测可能与LPL2的~(83)N位点突变所导致的N-糖基化位点缺失有关。〗
【作者单位】： 南京农业大学无锡渔业学院;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室;
【关键词】： 鲤鱼 脂蛋白脂肪酶 基因克隆 原核表达 酶活性
【基金】：江苏省水产三新工程项目(Y2015-4) 江苏省自然科学基金项目(BK20141096) 中央级基本科研业务费项目(2015JBFM10)
【分类号】：S917.4
【正文快照】： gene cloning;prokaryotic expression;enzyme activity脂蛋白脂肪酶(LPL)是一种限速酶[1],水解血浆中乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的甘油三酯[2],使机体能够利用从食物中摄取以及肝脏中合成的脂肪,从而产生供组织利用的脂肪酸和单酰甘油,这一特性对于生物体能量代谢、信号转导

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本文编号：453460