黄瓜CsERECTA基因的原核表达及其多克隆抗体制备

发布时间：2017-06-22 03:08

  本文关键词：黄瓜CsERECTA基因的原核表达及其多克隆抗体制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：ERECTA基因编码一个富含亮氨酸重复序列结构的丝/苏氨酸类受体蛋白激酶,参与调控植物器官的形态建成,在株型控制及抗逆方面也有重要作用。该研究通过构建带有maltose binding protein(MBP)标签的pET21a-CsERECTA融合蛋白原核表达载体,实现了在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的高效表达,并对诱导表达的温度、时间和IPTG浓度进行了优化。利用镍离子螯合层析纯化得到MBP-CsERECTA融合蛋白,再用rTEV蛋白酶对其进行酶切,得到CsERECTA蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体。结果表明,黄瓜CsERECTA蛋白以可溶和包涵体2种形式表达,低温有助于蛋白以可溶性形式大量存在。最佳诱导温度为23℃,诱导时间为6h,IPTG浓度为0.5mmol·L~(-1)。通过Western blot可检测到黄瓜内源的CsERECTA蛋白,说明制备的多可隆抗体具有较好的特异性。多克隆抗体的成功制备为进一步研究CsERECTA的功能奠定了基础。
【作者单位】： 西北农林科技大学园艺学院;西北农林科技大学生命科学学院;
【关键词】： 黄瓜 CsERECTA基因 原核表达 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(31071791) 高校基本科研业务费专项资金(YQ2013003) 西北农林科技大学国际科技合作基金项目
【分类号】：Q943.2;S642.2
【正文快照】： ERECTA是一个编码富含亮氨酸重复序列的类受体蛋白激酶基因[1]。植物ERECTA基因控制着植株生长发育的多个方面,比如地上部分器官的伸长、叶的生长、花序的发育和表皮的分化等[2]。由于ERECTA突变体是在Landsberg背景的拟南芥中发现的,其具有矮生的特性,便于培养和操作,因此目

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