基于Nc2和Nc5基因的新孢子虫PCR方法的建立

发布时间：2017-06-22 06:00

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【摘要】：本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499F/SN/T3499R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499F/SN/T 3499R的最低检测量相同,为19.9fg/μL,F2/R2最低检测量为199fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499F/SN/T 3499R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9pg/μL和199fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。
【作者单位】： 新疆农业大学动物医学学院;伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心;巴音郭楞职业技术学院生物工程系;
【关键词】： 新孢子虫 新孢子虫病 牛 PCR
【基金】：自治区科技成果转化专项资金项目(201454129) 库尔勒市重点科技计划项目(2013051108)
【分类号】：S852.7
【正文快照】： 新孢子虫病(neosporiasis)是由犬新孢子虫(Neosporacaninum)寄生于多种哺乳动物有核细胞内的一种原虫病[1],主要引起妊娠母畜流产、死胎或新生儿运动障碍和神经系统疾病[2],妊娠母牛对该病尤为敏感。其传播方式包括水平传播和垂直传播,宿主动物通过吞食终末宿主(犬)粪便中的孢

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本文编号：470841