西葫芦抗PRSV、CMV遗传分析和抗性基因初步定位

发布时间：2017-07-14 15:24

  本文关键词：西葫芦抗PRSV、CMV遗传分析和抗性基因初步定位

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【摘要】：番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-w)和黄瓜花叶病毒(CMV)是我国西葫芦种植过程中危害西葫芦生产的主要病毒害。分别以纯合自交系感病品种葫八父(P1A)和抗病品种08-1(P2A)、感病品种纤一白(P1B)和抗病品种08-13(P2B)构建两个6世代遗传群体A和B,对西葫芦PRSV-w、CMV抗性遗传规律进行研究。使用732对SSR引物和38对EST-SSR引物,对西葫芦PRSV-w、CMV抗性位点进行初步定位。研究结果表明:1、西葫芦抗PRSV-w抗性性状是一个受核基因控制的性状,PRSV-w感病对抗病表现为不完全显性,是由单基因控制的质量性状。西葫芦抗CMV抗性性状也是一个受核基因控制的性状,CMV感病对抗病表现为不完全显性,是由单基因控制的质量性状。2.设计[L9(3)4]正交试验,获得最优的西葫芦SSR-PCR体系:15uL体系中Mg2+为1.5mmol/L、Taq酶2.2U、引物0.3umol/L、dNTPs0.3mmol/L,10×Buffer,50ng模板DNA。3.西葫芦抗PRSV-w的抗性基因初步定位:用732对SSR引物38对EST-SSR引物分别对PRSV-w的A群体父母本及其F2、B群体父母本及其F2的抗感池和CMV的A群体父母本及其F2、B群体父母本及其F2抗感池进行扩增。其中对PRSV-w的扩增结果中A群体有m162、m140、m29、m112、mc43、mc64和m80这7组引物在抗感池中扩增出多态性条带,B群体有m141、m162、m126、m64、p265、p201和m80这7组引物在抗感池中扩增出多态性条带。这7组引物经F2代单株验证和连锁分析,筛选出的标记引物m80和m162西葫芦抗PRSV-w抗病位点连锁,遗传距离3.7cM,获得的特异性片段约200bp。CMV未能在此批引物中获得连锁引物。
【关键词】：西葫芦 PRSV-w CMV 遗传分析 分子标记 连锁分析
【学位授予单位】：河北工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S642.6
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 符号及缩略词表9-10
• 第一章 绪论10-17
• 1.1 西葫芦概述10
• 1.2 西葫芦育种进展10-11
• 1.3 西葫芦主要病毒病11-12
• 1.3.1 葫芦科的主要病毒病11
• 1.3.2 西葫芦病毒病11
• 1.3.3 番木瓜环斑病毒西瓜株系（PRSV-w）11-12
• 1.3.4 黄瓜花叶病毒（CMV）12
• 1.4 分子标记技术12-15
• 1.4.1 SSR分子标记技术研究进展13-14
• 1.4.1.1 开发SSR分子标记的传统方法13-14
• 1.4.1.2 运用富集技术筛选SSR分子标记14
• 1.4.1.3 运用PCR技术开发SSR分子标记14
• 1.4.2 PCR技术14-15
• 1.4.3 分子标记辅助选择15
• 1.5 研究目的及意义15-17
• 第二章 西葫芦抗PRSV-w、CMV遗传规律研究17-23
• 2.1 材料和方法17-21
• 2.1.1 试验材料17-18
• 2.1.2 种子处理18
• 2.1.3 病毒扩繁18
• 2.1.4 病毒接种18-19
• 2.1.5 PRSV-w和CMV单株发病分级标准：19-21
• 2.2 结果与分析21-22
• 2.3 讨论22-23
• 第三章 西葫芦SSR-PCR反应体系优化23-29
• 3.1 试验材料23
• 3.1.1 西葫芦材料23
• 3.1.2 仪器和药品23
• 3.2 试验方法23-24
• 3.2.1 主要试验试剂的配制23-24
• 3.2.2 西葫芦DNA提取方法24
• 3.3 SSR-PCR反应体系优化24-27
• 3.3.1 西葫芦DNA提取质量检测24
• 3.3.2 SSR-PCR反应体系优化24-25
• 3.3.3 电泳结果分析25-27
• 3.3.3.1 Acr-bis胶的制备25-26
• 3.3.3.2 电泳26
• 3.3.3.3 固定、银染、显色26-27
• 3.4 结果与分析27-28
• 3.5 讨论28-29
• 第四章 西葫芦抗PRSV-w、CMV的SSR引物筛选29-34
• 4.1 试验材料29
• 4.1.1 西葫芦材料29
• 4.1.2 仪器和药品29
• 4.2 试验方法29
• 4.2.1 引物29
• 4.2.2 西葫芦DNA提取方法(碱裂解法)29
• 4.2.3 F_2DNA池的构建29
• 4.3 结果与分析29-32
• 4.3.1 SSR标记在A群体和B群体父母本中的差异29-30
• 4.3.2 F_2多态性SSR标记筛选30-32
• 4.3.3 SSR分子标记在F_2中的连锁分析32
• 4.4 讨论32-34
• 结论34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-40
• 作者简介40-41

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑志强;;西葫芦病毒病的发生与防治[J];现代农业科技;2015年08期

2 罗兵;孙海燕;徐港明;扬志刚;沈宗根;顾雯雯;高阳;郑佳亮;;SSR分子标记研究进展[J];安徽农业科学;2013年12期

3 罗冉;吴委林;张e，

本文编号：541640