CaXMT和TCS1突变体基因串联共表达及体外酶活检测分析

发布时间：2017-08-12 18:31

  本文关键词：CaXMT和TCS1突变体基因串联共表达及体外酶活检测分析

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【摘要】：咖啡碱和可可碱是茶叶生物碱的主要组分,且咖啡碱是茶叶重要的滋味物质,随着咖啡碱在食品和药物领域的应用愈发广泛,咖啡碱的生物合成成为新的研究热点。目前市场上的咖啡碱主要靠化学合成,为了探索其生物合成途径,该研究将咖啡黄嘌呤核苷甲基转移酶(coffee xanthosine methyltransferase,Ca XMT)基因和茶树咖啡碱合成酶(tea caffeine synthase,TCS1)基因的4个突变体分别串联至同一大肠杆菌表达载体p MAL-c5X,诱导融合蛋白共表达,并进行SDS-PAGE凝胶电泳分析。结果表明:目的蛋白成功表达后,应用超声破碎法制备含有目的蛋白的粗酶液,添加底物黄嘌呤核苷(xanthosine,XR)和甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(Sadenosyl-L-methionine,SAM)进行体外酶促反应,将反应产物进行高效液相色谱检测。检测结果显示,p MALCa XMT-TM2/3/4的体外酶促反应产物仅有可可碱生成,均未见咖啡碱生成。该研究结果为构建生物合成咖啡碱和可可碱的串联共表达载体奠定了基础,也为进一步研究生物合成咖啡碱和可可碱提供了新思路。
【作者单位】： 安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室;
【关键词】： 咖啡碱 串联共表达 体外活性
【基金】：国家自然科学基金(31170649,31570692)~~
【分类号】：Q946.88
【正文快照】： 咖啡碱(1,3,7-三甲基黄嘌呤)和可可碱(3,7-二甲基黄嘌呤)一同被归类为嘌呤生物碱,存在于茶、咖啡以及大部分软饮料中(Ashihara et al,2008)。咖啡碱不但能刺激神经系统和呼吸系统,增强无氧运动时的耐力,而且具有利尿、抗癌的作用(吴命燕等,2010;Panayiotis et al,2013)。咖啡

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本文编号：663047