钼镉联合诱导对麻鸭卵巢抗氧化功能及相关基因表达量的影响
本文关键词：钼镉联合诱导对麻鸭卵巢抗氧化功能及相关基因表达量的影响
【摘要】：为了探究钼镉联合暴露对鸭卵巢的组织学、抗氧化能力及相关基因表达量的影响,本研究选取360只11日龄“江南2号”麻鸭,并随机分成6组,每组60只,分别是Control组、钼Ⅰ组、钼Ⅱ组、镉组、钼镉联合Ⅰ组和钼镉联合Ⅱ组。Control组饲喂基础日粮,其余各组饲料分别在每千克基础日粮中添加15 mg Mo、100 mg Mo、4 mg Cd、15 mg Mo+4 mg Cd以及100 mg Mo+4 mg Cd。实验选用七钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]作为钼源,硫酸镉(3Cd SO4·8H2O)为镉源。试验期为120d。在试验进行至第60d、90d和120d时,每组随机选取10只麻鸭,剖杀并采集卵巢组织。检测卵巢组织匀浆的抗氧化指标,炎症细胞因子基因NF-κB、TNF-α、COX-2,凋亡基因Bcl-2、Bak-1和Caspase-3及CP基因mRNA的表达量;同时,制作120d卵巢组织病理切片和超薄切片,观察卵巢组织学变化和细胞超微结构变化。结果如下:1.钼镉共同作用导致卵巢组织匀浆中T-AOC、SOD、XOD、CAT酶活性显著降低(P0.05),NOS活性和MDA含量增加(P0.05);2.钼镉共同作用导致卵巢细胞膜损伤,线粒体肿胀、空泡化、嵴断裂,细胞器溶解,核固缩,核膜破裂;3.低剂量的钼(15 mg/kg Mo)和高剂量的钼(100 mg/kg Mo)对卵巢组织的损伤程度较轻。镉(4 mg/kg Cd)对卵巢组织的损伤程度大于低钼和高钼,导致部分卵泡发育不良,充血、出血明显。钼镉联合处理对卵巢组织的损伤更加严重,其中,高钼镉(100 mg/kg Mo+4 mg/kg Cd)导致大量卵泡发育不良,出血、坏死程度加剧及面积增大,大量结缔组织呈纤维素性坏死,对卵巢组织造成的损伤最为严重。4.钼镉共同作用导致卵巢Bak-1和Caspase-3基因mRNA表达量显著上升(P0.05),CP和Bcl-2 mRNA的表达量显著下降(P0.05);5.钼镉联合显著上调卵巢中NF-κB、TNF-α、COX-2基因mRNA表达量(P0.05);结论:钼镉联合作用可致鸭卵巢脂质过氧化水平上升,造成卵巢氧化损伤;同时导致多数卵泡发育不良,卵巢间质充血、出血明显,大量结缔组织呈纤维素样坏死。钼镉联合作用导致CP和Bcl-2基因mRNA的表达量下降,Bak-1和Caspase-3的mRNA表达量增加。钼镉联合作用可诱导卵巢中炎症细胞因子NF-κB、COX-2和TNF-α基因mRNA表达量明显增加,诱发卵巢发生炎性应答反应,造成卵巢的炎性损伤。
【关键词】：钼 镉 鸭 卵巢 凋亡基因 炎症细胞因子
【学位授予单位】：江西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.32
【目录】：
- 摘要6-7
- Abstract7-8
- 缩略词表8-9
- 前言9-10
- 第一章 文献综述10-20
- 1 钼10-15
- 1.1 钼元素介绍10-11
- 1.2 钼的动力学11
- 1.2.1 钼的分布11
- 1.2.2 钼的吸收和代谢11
- 1.3 钼的生物学作用11-12
- 1.4 钼缺乏12-13
- 1.5 钼的毒性作用13-15
- 1.5.2 钼中毒对机体抗氧化系统的影响13-14
- 1.5.3 钼中毒对生殖系统的影响14
- 1.5.4 钼中毒对组织的病理损伤14-15
- 2 镉15-17
- 2.1 镉的毒性作用15-16
- 2.2 镉中毒对生殖系统的影响16
- 2.3 镉中毒对机体抗氧化机能的影响16
- 2.4 镉中毒对组织的病理损伤16-17
- 3 钼、镉对铜蓝蛋白的影响17-18
- 4 钼、镉对细胞凋亡基因的影响18-19
- 5 钼、镉对炎症细胞因子的影响19
- 6 本研究的目的和意义19-20
- 第二章 试验研究20-48
- 1 材料与方法20-26
- 1.1 试验动物的饲养管理20
- 1.2 主要仪器20-21
- 1.3 辅助器材21
- 1.4 主要试剂21
- 1.5 试验设计21-22
- 1.6 样品采集22
- 1.7 卵巢组织匀浆的制作22-23
- 1.8 卵巢组织中总RNA的提取与荧光定量扩增反应23-25
- 1.8.1 卵巢总RNA的提取及基因引物探针的设计23-24
- 1.8.2 RNA纯度及完整性检测24
- 1.8.3 去基因组DNA和反转录24
- 1.8.4 Taq Man RT-PCR反应24-25
- 1.8.5 SYBR Green RT-PCR反应25
- 1.9 数据分析25-26
- 1.9.1 相对定量计算方法25-26
- 1.9.2 数据差异性分析26
- 2 结果与分析26-41
- 2.1 钼镉联合诱导对卵巢抗氧化能力的影响26-30
- 2.1.1 钼镉联合诱导对卵巢NOS活性的影响26-27
- 2.1.2 钼镉联合诱导对卵巢T-AOC的影响27
- 2.1.3 钼镉联合诱导对卵巢XOD活性的影响27-28
- 2.1.4 钼镉联合诱导对卵巢SOD活性的影响28-29
- 2.1.5 钼镉联合诱导对卵巢CAT活性的影响29
- 2.1.6 钼镉联合诱导对卵巢MDA含量的影响29-30
- 2.2 钼镉联合诱导对卵巢相关基因mRNA表达量的影响30-37
- 2.2.1 凋亡基因Bcl-2 mRNA相对表达量的结果30-31
- 2.2.2 凋亡基因Bak-1 mRNA表达量的结果31-32
- 2.2.3 凋亡基因Caspase-3 mRNA表达量的结果32-33
- 2.2.4 卵巢CP基因mRNA表达量的结果33-34
- 2.2.5 卵巢NF-κB基因mRNA表达量的结果34-35
- 2.2.6 卵巢TNF-α 基因mRNA表达量的结果35-36
- 2.2.7 卵巢COX-2 基因mRNA表达量的结果36-37
- 2.3 钼镉联合诱导对卵巢组织病理学的影响37-38
- 2.4 卵巢超微结构的观察结果38-41
- 3 讨论41-47
- 3.1 钼镉联合诱导对卵巢抗氧化能力的影响41-42
- 3.2 钼镉联合诱导对卵巢组织的病理损伤42-43
- 3.3 钼镉联合诱导对卵巢超微结构的损伤作用43
- 3.4 钼镉联合诱导对卵巢凋亡调控基因mRNA表达量的影响43-45
- 3.5 钼镉联合诱导对卵巢CP mRNA表达量的影响45
- 3.6 钼镉联合诱导对卵巢炎症细胞因子基因mRNA表达量的影响45-47
- 4 结论47-48
- 参考文献48-54
- 附录：硕士期间发表的论文54-55
- 致谢55
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本文编号：715031
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