水稻细胞色素P450基因家族成员CYP81A6基因RNAi载体构建

发布时间：2017-08-23 02:22

  本文关键词：水稻细胞色素P450基因家族成员CYP81A6基因RNAi载体构建

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【摘要】：水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应,为了深入研究该基因的功能,本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体。首先设计带有酶切位点的基因特异性引物,以c DNA为模板扩增3'非翻译区的特异片断,将目的产物连接到T载体上,经菌落PCR和酶切鉴定后进行测序。测序结果表示,目的片断已正确克隆到T载体上。然后利用双酶切通过2次亚克隆将目的片断以反向重复克隆到RNAi载体ds1301,通过分子检测表明,CYP81A6的RNAi载体构建成功,有助于后续的基因功能和作用机理的研究。
【作者单位】： 中南民族大学生命科学学院武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室生物技术国家民委重点实验室;
【关键词】： 水稻 CYPA RNA干涉 基因克隆
【基金】：国家转基因重大专项(2014ZX0800904B) 国家自然科学基金面上项目(31370306)共同资助
【分类号】：Q943.2
【正文快照】： 细胞色素P450(CYPs)代表着一个很大的可自身氧化的亚铁血红素蛋白家族,属于单氧酶的一类,因其在450 nm有特异吸收峰而得名。它是以还原态与CO结合后在波长450 nm处有吸收峰,同时也是一类具有混合功能的血红素氧化酶系,其广泛分布于动物、微生物和植物体内(Bak et al.,2000;Lv

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本文编号：722440