苏云金芽胞杆菌CcpA蛋白对几丁质酶基因chiA和chiB的表达调控作用

发布时间：2017-09-15 05:53

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【摘要】：【目的】研究苏云金芽胞杆菌Bti75中糖代谢蛋白Ccp A对两种几丁质酶基因chi A和chi B的表达调控。【方法】利用PREDetector软件分析Bti75 chi A和chi B的基因上游区序列,EMSA方法在体外验证Ccp A是否能与chi A和chi B基因的启动子区域片段特异性结合。构建ccp A基因敲除载体以获得敲除突变株Δccp A,运用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术比较有无葡萄糖存在的情况下,Ccp A对chi A和chi B基因表达的影响。【结果】计算机分析显示,chi B上游启动子区存在一个潜在的Ccp A结合位点crechi B,而chi A上游启动子区未发现类似序列。体外实验表明,Ccp A蛋白在共阻遏蛋白Hpr-Ser45-P的参与下可与chi B基因启动子区特异性结合,而与chi A基因启动子区没有特异性结合;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示,Bti75中ccp A基因敲除后,同样在葡萄糖存在下chi B的表达量提高而chi A的表达量变化不明显。【结论】在葡萄糖存在的情况下,Ccp A蛋白能抑制苏云金芽胞杆菌中几丁质酶chi B的表达,而chi A的表达不受Ccp A调控。
【作者单位】： 南开大学生命科学学院微生物系;分子微生物学与技术教育部重点实验室;天津市微生物功能基因组学重点实验室;
【关键词】： 苏云金芽胞杆菌 CcpA蛋白 几丁质酶 表达调控
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31371979) 天津市自然科学基金项目(No.15JCYBJC30200)~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生的几丁质酶(Chitinase)可以水解几丁质,具有抑制真菌生长和明显的杀虫增效作用;而几丁质水解产生的几丁单糖(Glc NAc)以及分子大小不等的几丁寡糖[(Glc NAc)n],广泛参与细菌碳源和氮源的代谢。多种微生物在进化过程中形成了严格

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