罗非鱼无乳链球菌EsxA基因克隆与原核表达

发布时间：2017-09-25 18:02

  本文关键词：罗非鱼无乳链球菌EsxA基因克隆与原核表达

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【摘要】：Ⅶ型分泌系统(T7SS)是近年来发现的分泌系统,分泌两种胞外蛋白,EsxA基因编码的ESAT6蛋白和EsxB基因编码的CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性,促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能,与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板,克隆到294bp的EsxA基因,将目的序列克隆到pMD18-T载体,经测序,目的序列与无乳链球菌EsxA基因同源率在99%以上。EsxA基因克隆到pET32a载体中,重组载体在28℃、0.5mmol/L IPTG诱导条件下表达量最大,可溶性表达。将纯化的ESAT6蛋白免疫Balb/c鼠,成功制备ESAT6蛋白鼠多克隆抗体,经Western blot,ESAT6蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步进行无乳链球菌ESAT6蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。
【作者单位】： 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室;
【关键词】： Ⅶ型分泌系统 无乳链球菌 EsxA基因 克隆与表达
【基金】：广东省海洋渔业局科技与产业发展专项(A201401C06) 广州市农业科技攻关项目(GZCQC1202FG04002-01) 广州市科技攻关项目(2014J4100229)
【分类号】：S943
【正文快照】： Ⅶ型分泌系统(typeⅦsecretion system,T7SS)由多种组分构成,分泌两种具有免疫原性的胞外蛋白,即EsxA基因编码的早期分泌抗原靶6(earlier secreted antigen target 6,ESAT6)和EsxB基因编码的培养滤液蛋白10(culture filter protein10,CFP-10)。它们具有良好的免疫原性,能改变

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本文编号：918756