口腔鳞状细胞癌中Dickkopf-3基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

发布时间：2017-09-30 07:46

  本文关键词：口腔鳞状细胞癌中Dickkopf-3基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

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【摘要】：目的:口腔癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一,位居人类全身恶性肿瘤的第六位。目前,我国口腔癌的发病率居高不下,经流行病学调查研究表明其病因与吸烟、饮酒、口腔卫生等多种因素相关,且呈年轻化的趋势。尽管随着多学科综合序列治疗模式的引入使口腔癌的治疗取得了一定程度上的突破,但其五年生存率仍不理想。DKK-3(Dickkopf-3)作为Wnt信号传导通路中重要的抑制剂之一,先后在肺癌、食管癌、甲状腺癌等恶性肿瘤中发现其m RNA的低表达及启动子区的高甲基化状态,提示DKK-3可作为候选抑癌基因参与恶性肿瘤的发生与发展。但目前关于DKK-3基因在口腔颌面部恶性肿瘤中的研究仍鲜有报道。因此,本实验通过检测口腔鳞状细胞癌组织及相应正常口腔黏膜组织中DKK-3基因m RNA的表达水平及其启动子区的甲基化状态,探索DKK-3基因与口腔癌发生发展的关系,为DKK-3成为新的口腔癌靶基因治疗的生物学指标提供理论依据。方法:选取河北医科大学第四医院口腔科2014年09月至2015年12月手术切除的原发口腔鳞癌组织为研究对象,癌旁2cm处的正常口腔黏膜组织为对照。术后经病理证实癌组织标本为鳞状细胞癌,癌旁组织非肿瘤组织。所用标本均为术后立即取材,于-80°冰箱中冻存。应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)的方法分别检测DKK-3基因在口腔鳞癌组织及相应正常黏膜组织m RNA的表达情况及其启动子区的甲基化状态,并运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计学处理,分析DKK3与年龄、性别、吸烟、临床分期及有无淋巴结转移等各临床病理特征的关系。结果:1 DKK-3基因m RNA在口腔鳞癌组织中的相对表达量为0.41±0.27,在其对应正常口腔黏膜中相对表达量为0.50±0.29,经统计学分析,二者差异有统计学意义(t=-12.580,P0.05)。同时,吸烟组DKK-3基因m RNA的相对表达量0.22±0.16低于不吸烟组m RNA相对表达量0.63±0.21(t=-8.018,P0.05);临床Ⅰ期、Ⅱ期的DKK-3基因m RNA的相对表达量0.46±0.29高于临床Ⅲ期、Ⅳ期m RNA的相对表达量0.28±0.19(t=2.214,P0.05);有淋巴结转移组DKK-3基因m RNA的相对表达量0.24±0.17低于无淋巴结转移组m RNA的相对表达量0.50±0.28(t=-4.114,P0.05),DKK-3基因m RNA的相对表达量与性别和年龄无关(P0.05);2 DKK-3基因启动子区在口腔鳞癌组织中的甲基化率为49.0%(25/51),明显高于其对应正常口腔黏膜组织的甲基化率7.8%(4/51)(χ~2=19.273,P0.05)。同时,吸烟组的甲基化率64.3%(18/28)高于不吸烟组甲基化率30.4%(7/23)(χ~2=5.790,P0.05);临床Ⅰ期、Ⅱ期的甲基化率38.9%(14/36)低于Ⅲ期、Ⅳ期的甲基化率73.3%(11/15)(χ~2=5.027,P0.05);但是DKK-3基因启动子区在口腔鳞癌组织中的甲基化率与性别、年龄及有无淋巴结转移无关(P0.05);3 DKK-3基因发生甲基化的口腔鳞癌组织m RNA的相对表达量0.30±0.21低于未发生甲基化的口腔鳞癌组织m RNA的相对表达量0.51±0.29(t=-2.817,P0.05)。结论:1口腔鳞癌组织中DKK-3基因m RNA的相对表达量低于正常口腔黏膜组织。该结果提示在口腔鳞癌中DKK-3基因可能是抑癌基因,其表达下调或沉默可能导致了口腔癌的发生与发展,该基因的异常表达与吸烟、临床分期及有无淋巴结转移有关,与性别和年龄无关。2口腔鳞癌组织中DKK-3基因启动子区甲基化状态明显高于相应正常口腔黏膜组织。提示DKK-3基因启动子区的高甲基化状态可能是口腔癌发病的重要机制之一,同时,该基因启动子的异常甲基化状态与吸烟和临床分期有关,与性别、年龄及有无淋巴结转移无关。3在口腔鳞癌组织中DKK-3基因m RNA在甲基化阳性病例中的相对表达量低于甲基化阴性病例中m RNA的相对表达量。研究结果提示DKK-3基因启动子区的高甲基化可能是导致其转录沉默的主要原因。
【关键词】：口腔鳞状细胞癌 DKK-3基因 Wnt信号通路 表观遗传学 甲基化
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-20
• 结果20-22
• 附图22-24
• 附表24-27
• 讨论27-32
• 结论32-33
• 参考文献33-35
• 综述 Wnt信号通路及其与口腔颌面部恶性肿瘤关系的研究进展35-45
• 参考文献42-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

【参考文献】

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1 张敏;朱卫丰;嵇琴;孙振;周莹;章明;彭淑红;;抗肿瘤中药对DNA去甲基化作用的研究进展[J];中国实验方剂学杂志;2015年23期

2 李博磊;李龙江;周学东;程磊;;口腔微生物与口腔癌[J];口腔医学研究;2015年06期

3 陈婵婵;凌均h，

本文编号：946984