丹参水杨酸结合蛋白基因的克

发布时间：2017-10-08 04:14

  本文关键词：丹参水杨酸结合蛋白基因的克隆、表达分析

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【摘要】：[目的]从丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)培养细胞中克隆水杨酸结合蛋白(salicylic acid binding protein 2,SABP2)基因Sm SABP2并对其进行表达分析。[方法]用Trizol法提取丹参细胞总RNA,反转录得到c DNA,通过PCR扩增Sm SABP2,将其连接到p MD-19T simple载体中,利用酶切连接的方法构建p ET28a-Sm SABP2原核表达载体,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,检测蛋白酯酶活性。利用RT-q PCR测定水杨酸处理2 h的丹参悬浮细胞中Sm SABP2的表达量。[结果]PCR扩增获得了长度为780 bp的Sm SABP2,成功构建了原核表达载体p ET28aSm SABP2,IPTG诱导得到了Sm SABP2,SDS-PAGE电泳结果显示诱导8 h优于4 h,q PCR检测发现水杨酸处理2 h内Sm SABP2相对表达量持续升高。[结论]从丹参培养细胞中克隆了大小为780 bp的Sm SABP2,成功表达出了有活性的Sm SABP2,并且该基因能够强烈响应水杨酸诱导。
【作者单位】： 西北农林科技大学生命科学学院;
【关键词】： 丹参 基因克隆 SmSABP 原核表达 qPCR
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31670301;No.31170274) 国家级创新创业训练计划项目(No.201610712080)
【分类号】：S567.53;Q943.2
【正文快照】： 水杨酸(salicylic acid,SA)是广泛存在于植物体内参与调控其生长、发育过程的植物新内源激素[1],也是能够激活植物系统获得性抗性(systemic ac-quired resistance,SAR)和过敏反应(hypersensitiveresponse,HR)的重要内源信号分子[2]。SA作为一个关键信号分子在植物受到病原菌侵

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本文编号：991915