小鼠β-actin基因的RT-PCR克隆与真核表达

发布时间：2017-10-08 04:27

  本文关键词：小鼠β-actin基因的RT-PCR克隆与真核表达

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【摘要】：以Trizol-异丙醇法提取小鼠肝脏总RNA,根据NCBI数据库中小鼠β-actin基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增小鼠β-actin基因编码区并测序;以pcDNA3.1-flag为载体,构建β-actin基因真核表达质粒,继而将其重组产物转染于HeLa细胞,采用Western blot印迹法鉴定重组蛋白pcDNA3.1-flag/β-actin的表达水平。结果表明:克隆获得的289 bp片段与NCBI数据库中β-actin基因序列完全吻合,并且成功构建的pcDNA3.1-flag/β-actin真核基因表达载体,其重组质粒可在HeLa细胞中有效表达约43×10~3KD融合蛋白。
【作者单位】： 辽东学院农学院;
【关键词】： 小鼠 β-actin基因 RT-PCR 克隆 真核表达
【分类号】：Q78
【正文快照】： β-actin基因编码肌动蛋白,微丝的主要蛋白质成分,具收缩功能,广泛分布。由于β-actin基因在各组织细胞中的表达水平相对恒定,故检测基因表达水平时,常作为相对定量分析的参照,而被公认为内参基因[1],亦称“管家基因”[2]。β-ac-tin蛋白表达水平通常恒定[3],常作为Western bl

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1 张杰;彭胜民;周波;战晴晴;张荣沭;马凤鸣;;RT-PCR克隆甜菜硝酸还原酶cDNA全长序列及分析[J];植物研究;2008年04期

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本文编号：991996