人表皮生长因子受体酪氨酸激酶的克隆表达和酶抑制剂筛选模型的构建

发布时间：2016-11-28 15:48

  本文关键词：靶向表皮生长因子受体的肿瘤生物治疗方法研究进展，由笔耕文化传播整理发布。

《中国协和医科大学》 2008年

人表皮生长因子受体酪氨酸激酶的克隆表达和酶抑制剂筛选模型的构建

张洋  

【摘要】： 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)属受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase,RTK)家族成员。EGFR在与配基EGF结合后,诱导受体二聚化,并激活胞内区的酪氨酸激酶和发生自磷酸化反应。 人的EGFR基因定位于第7号染色体的短臂(7p12.3-p12.1),它的编码产物EGFR由1210个氨基酸组成,是一种分子量约为170 kDa跨膜糖蛋白。其中,712-979位属于酪氨酸激酶区。EGFR由含621个氨基酸残基构成的胞外域、23个氨基酸残基组成的跨膜区、和具有酪氨酸激酶活性由542个氨基酸残基形成的胞内结构域组成。 EGFR在细胞信号转导通路中具有十分重要的作用。许多肿瘤的发生、发展都与EGFR胞内酪氨酸激酶的异常表达密切相关。因此,EGFR胞内酪氨酸激酶的抑制剂有可能成为治疗肿瘤的有效药物。 本研究从人脐静脉内皮细胞(HUVEC)提取总RNA,采用RT-PCR获得EGFR酪氨酸激酶(EGFR-TK)催化域的编码基因。以pET-30a为载体,在E.coli BL21(DE3)中成功克隆并表达了EGFR-TK。采用Ni-NTA亲和层析对表达产物进行了纯化,通过对酶活性的测定,证明重组EGFR酪氨酸激酶蛋白具有利用ATP催化底物发生磷酸化反应的激酶活性。以该重组激酶为靶位构建了酶抑制剂筛选模型,对微生物代谢产物进行了筛选,初筛获得9株阳性菌株,为研究新型结构的抗肿瘤微生物药物奠定了基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R96
【目录】：

缩略语一览表4-6

中文摘要6-7

英文摘要7-8

前言8-10

材料与方法10-21

结果21-42

讨论42-44

结论44-45

论文部分参考文献45-46

文献综述46-63

综述部分参考文献63-67

已发表文章67-68

致谢68-69

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王惠杰,王燕,张湘茹,孙燕;Gefitinib靶向治疗非小细胞肺癌的现状与展望[J];癌症进展;2005年02期

2 赵颖;高利伟;周清华;;表皮生长因子受体与酪氨酸激酶抑制剂在NSCLC靶向治疗中的研究[J];中国肺癌杂志;2006年01期

3 薛浩伟;张令达;;表皮生长因子受体家族与口腔肿瘤[J];广东牙病防治;2007年03期

4 王洪波;陈晓光;;EGFR抑制剂耐药机制研究的新进展[J];国际药学研究杂志;2007年05期

5 谢一利,楼丽广;表皮生长因子受体信号通路及其靶向肿瘤治疗[J];国外医学(肿瘤学分册);2005年05期

6 于晓棠,陆世伦,朱世能;表皮生长因子受体与肿瘤[J];复旦学报(医学版);2005年04期

7 郭晓宁,丁健;首个酪氨酸激酶抑制剂药物Gleevec[J];生理科学进展;2003年02期

8 张勇,王渭池,李元;人可溶性白介素4受体(sIL4R)在大肠杆菌中的表达和纯化[J];中国生物化学与分子生物学报;2004年06期

9 曹川;戴霞;李世荣;;受体酪氨酸蛋白激酶的研究[J];医学综述;2008年12期

10 胡春宏,马进安;治疗转移性乳腺癌的新药——Herceptin[J];中国癌症杂志;2000年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 尚书恒;马廷行;李春华;;TP方案和易瑞沙二线治疗非小细胞肺癌的比较[J];安徽医学;2009年07期

2 谢红建;白咸勇;;针对表皮生长因子受体的胃癌导向治疗研究进展[J];滨州医学院学报;2007年04期

3 郭琛;郭其森;曾洪生;禚银玲;管燕;刘秀菊;;非小细胞肺癌患者肿瘤组织与外周血中EGFR表达相关性研究[J];中国肺癌杂志;2010年12期

4 孙学战;刘源岗;王士斌;陈爱政;骆志勇;;栓塞型载卡培他滨微胶囊的性能[J];复合材料学报;2011年05期

5 王立升;于海侠;郭鑫;肖军海;李松;;抗Gleevec(STI-571)耐受的Bcr-Abl蛋白酪氨酸激酶抑制剂研究进展[J];广西大学学报(自然科学版);2006年01期

6 黄永青;;阿奇霉素联合复方苦参洗剂治疗分子靶向药物致痤疮样皮疹的疗效观察[J];海南医学;2011年22期

7 顾士敏;张谢夫;赵春临;刘涛;叶立群;程勇;蒋志强;;STAT3和EGFR在胃癌组织中的表达及意义[J];肿瘤基础与临床;2010年06期

8 刘娱;;抗肿瘤药物的研究进展及临床应用[J];华西药学杂志;2008年03期

9 刘小玲;李慧林;;分子靶向抗癌药物埃洛替尼的研究进展[J];杭州师范学院学报(医学版);2006年05期

10 于海侠;;Gleevec(STI-571)抑制Bcr-Abl酪氨酸激酶的机理[J];技术与教育;2010年02期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 王志刚;段家华;姚杰;王洋;;吉非替尼治疗化疗失败的晚期肺腺癌临床观察[A];第二届湖北省肿瘤靶向治疗学术会议论文选[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王大广;胃癌信号传导蛋白表达谱筛选和分析及XIAP、CDK6抑制剂对胃癌细胞的影响[D];吉林大学;2011年

2 宋波;高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞株差异表达基因的筛选和鉴定[D];大连医科大学;2005年

3 李志军;EGFR表达与EGFR基因突变在非小细胞肺癌中的临床意义[D];吉林大学;2007年

4 李丹;冬凌草甲素诱导人表皮癌A431细胞死亡机制研究[D];沈阳药科大学;2007年

5 王燕;吉非替尼靶向治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效预测和预后因素研究[D];中国协和医科大学;2007年

6 陈静;力达霉素抗胰腺癌作用的分子机制研究[D];中国协和医科大学;2007年

7 张昆仲;姜黄素与伊马替尼体外协同抗慢性粒细胞白血病的分子机制研究[D];福建医科大学;2007年

8 张宇飞;ABCG2在肺癌中的表达及EGF、IL-4对肺腺癌细胞ABCG2表达调节的研究[D];第四军医大学;2007年

9 段崇刚;蝶啶类表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的设计、合成及其抗癌活性研究[D];山东大学;2008年

10 张新合;皮下多发脂肪瘤致病相关基因分析[D];第二军医大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张明昊;卷毛突变大鼠的皮肤组织学特征及其分子遗传学研究[D];郑州大学;2010年

2 詹冬梅;噻吩“2，3-d”并嘧啶衍生物的合成与抗癌活性研究[D];华东理工大学;2011年

3 王志峰;表皮生长因子受体在垂体腺瘤中的表达和临床意义[D];广西医科大学;2011年

4 朱彦红;EGFR和EGFRvIII在人胃癌组织的表达及其临床意义[D];河南大学;2011年

5 孙晓丹;CDK1抑制剂汉黄芩素Mannich碱衍生物的成药性研究[D];大连理工大学;2011年

6 吴文;新型大环结构的激酶抑制剂的设计、合成及其生物活性研究[D];中南大学;2011年

7 商黎明;鼻咽癌中VEGF及其受体EGFR的表达及相关性的初步研究[D];浙江大学;2011年

8 樊平;EGFR基因突变在胃癌中的相关性研究[D];石河子大学;2010年

9 李进军;EGFR和ANXA2在人脑胶质瘤中的表达及临床意义[D];郑州大学;2011年

10 王伟;肺腺癌和COPD患者外周血Tc17细胞比例变化的差异[D];山东大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张智清,姚立红,侯云德;含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用[J];病毒学报;1990年02期

2 周清华;肺癌靶向治疗的现状与进展[J];中国肺癌杂志;2003年06期

3 马杰,宗志红,王兆元;表皮生长因子受体在涎腺腺样囊性癌不同细胞系中的表达[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2005年04期

4 陶谦,黄洪章,潘朝斌,陈伟良,曾融生;表皮生长因子受体和生长因子受体C-erbB-2在成釉细胞瘤中的表达及意义[J];口腔医学;2003年01期

5 韩新光,李金荣,赵怡芳;表皮细胞生长因子受体和转化生长因子α与舌鳞状细胞癌增殖/转移关系的观察[J];口腔医学研究;2005年02期

6 陈乔尔,吴继锋,王道斌,王元银;表皮生长因子受体在口腔鳞癌组织中的表达及意义[J];临床与实验病理学杂志;2000年01期

7 苏力坦·阿巴白克力,姬生健,朱玉贤;北非蝎昆虫毒素AaHIT1基因的原核表达和转基因分析[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年02期

8 庞晓军;黄军章;刘国勇;李香乐;;肿瘤基因治疗研究进展[J];药学实践杂志;2006年01期

9 程飚,付小兵,盛志勇;胎儿无瘢痕愈合与受体酪氨酸激酶[J];中华整形外科杂志;2003年04期

10 郭晓宁,林莉萍,章雄文,丁健;表皮生长因子受体酪氨酸激酶家族与肿瘤治疗[J];中国新药杂志;2005年10期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郭晓宁,林莉萍,章雄文,丁健;表皮生长因子受体酪氨酸激酶家族与肿瘤治疗[J];中国新药杂志;2005年10期

2 李萍;葛化冰;孙正;;GW2974对实验性口腔癌中EGFR及p-EGFR表达的抑制作用研究[J];临床口腔医学杂志;2008年02期

3 王章桂;孙国平;;表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药机制研究进展[J];肿瘤防治研究;2008年04期

4 杨衿记;;接受酪氨酸激酶抑制剂治疗的非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体的基因组变化:一项系统性评估[J];循证医学;2009年06期

5 李外;;抗肿瘤药物:脱离抑制[J];国外医学(药学分册);2007年03期

6 廖刚;王子卫;;靶向表皮生长因子受体的肿瘤生物治疗方法研究进展[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2009年01期

7 李林;李国;陈莉莉;罗海斌;陈静;沈旭;梅长林;;表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂高通量筛选模型的建立[J];第二军医大学学报;2009年12期

8 陈丽莉;苏俭生;;EGCG抗癌靶点中酪氨酸激酶受体RTKs的研究进展[J];同济大学学报(医学版);2011年03期

9 邓沁芳;周彩存;苏春霞;;非小细胞肺癌上皮-间质转化与EGFR突变以及临床病理特征之间的关系[J];肿瘤防治研究;2008年04期

10 王洁;白晓燕;;肺腺癌EGFR-TKI获得性耐药突变T790M的发现[J];循证医学;2008年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 吴静;葛高翔;林其谁;;表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法[A];第七届全国生物膜学术讨论会论文摘要汇编[C];1999年

2 徐美林;刘岩;钟镐镐;吴秉铨;;非小细胞肺癌表皮生长因子受体突变的检测及临床病理意义[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年

3 张尚权;;抗表皮生长因子受体单克隆抗体在肺癌生物治疗中的实验研究[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年

4 朱楠;张淑兰;牛菊敏;王敏;陆景明;;子宫肌瘤组织中表皮生长因子受体mRNA的表达及意义[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编[C];2001年

5 步荣发;布静秋;张海钟;;Irresa在口腔癌中的应用[A];第二届全国口腔颌面—头颈肿瘤内科综合治疗研讨会论文汇编[C];2006年

6 王卉;杨国仁;宋现让;赵书强;王兴武;赵伟;于金明;;[11C]PD153035表皮生长因子受体在不同表达水平肿瘤细胞的初步研究[A];首届全国分子核医学暨分子影像学学术交流会资料汇编[C];2006年

7 杨蓓蓓;陈嘉;;荧光定量PCR测定EGFRvⅢ表达的方法构建及在喉癌组织中的应用[A];2007浙江省耳鼻咽喉—头颈外科学术会议论文汇编[C];2007年

8 孙沫逸;刘宝林;蒋月桂;;涎腺腺样囊性癌表皮生长因子受体表达的调控研究[A];第一届全国口腔颌面部肿瘤学术会议论文汇编[C];2001年

9 钱军;秦叔逵;;以表皮生长因子受体为靶点的分子靶向治疗研究进展[A];全国肿瘤诊断与治疗药物分子靶点研究进展学术研讨会资料汇编[C];2005年

10 赵学维;李兵;徐志飞;孙光远;何金;刘惠敏;;表皮生长因子受体在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[A];中华医学会第六次全国胸心血管外科学术会议论文集（胸外科分册）[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 实习生 操秀英;[N];科技日报;2007年

2 本报记者 夏静　通讯员 冯俊杰;[N];光明日报;2009年

3 刘云涛;[N];中国医药报;2007年

4 郭久辉;[N];新华每日电讯;2007年

5 张新颖;[N];文汇报;2004年

6 本报特约撰稿人 陆志城;[N];医药经济报;2005年

7 ;[N];中国中医药报;2004年

8 记者　白毅;[N];中国医药报;2006年

9 王曼;[N];中国社会科学院院报;2005年

10 宿永波　张勇;[N];中国畜牧兽医报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘春平;人血管内皮生长因子受体-2基因（KDR）在链霉菌和大肠杆菌的克隆表达及其抑制剂筛选模型的构建研究[D];中国协和医科大学;2007年

2 冯利锋;c-Cbl介导的对P-选凝素诱导β2整合素活化的负反馈调控机制的研究和SHKBP1抑制表皮生长因子受体（EGFR）信号负调控机理的研究[D];浙江大学;2008年

3 陈跃军;表皮生长因子受体反式调节G蛋白偶联受体功能的研究[D];复旦大学;2008年

4 张国红;EGF对延迟整流性钾离子通道功能调节的研究[D];河北医科大学;2007年

5 胡箭;人可溶性低密度脂蛋白受体（sLDLR）和人可溶性高密度脂蛋白受体（sHDLR）基因在甲醇酵母中的克隆表达及人LDLR拮抗剂筛选模型的构建研究[D];中国协和医科大学;2002年

6 周建娅;盐酸埃克替尼治疗晚期非小细胞肺癌的药理研究及Ⅰ/Ⅱa期临床研究[D];浙江大学;2010年

7 王卉;肿瘤表皮生长因子受体PET/CT分子显像的实验研究[D];山东大学;2007年

8 陈芳进;细胞信号通路中酪氨酸磷酸化修饰和SHC1、SHC3与相关信号蛋白分子作用差异的计算生物学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

9 钟文昭;中国NSCLC人群EGFR-TKI治疗预测因子及EGFR下游信号通路机制研究[D];中山大学;2007年

10 蒋骅;GST-EGFR融合蛋白冲击树突状细胞治疗头颈部鳞状细胞癌体内外实验观察[D];浙江大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张洋;人表皮生长因子受体酪氨酸激酶的克隆表达和酶抑制剂筛选模型的构建[D];中国协和医科大学;2008年

2 邹海燕;鼻咽癌中EGFR调控APP和cystatin C信号通路及其功能的初步研究[D];中南大学;2007年

3 赵传华;吉非替尼与奥沙利铂联合对人肺癌细胞A549的作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年

4 孙光远;表皮生长因子受体与血管内皮生长因子在女性非小细胞肺癌中的表达及临床意义[D];第二军医大学;2006年

5 余鹏;三羟基异黄酮抑制哮喘小鼠气道黏液高分泌[D];华中科技大学;2006年

6 陈莹;碱性成纤维细胞生长因子对体外培养牙周膜细胞表皮生长因子受体基因表达的影响[D];吉林大学;2008年

7 赵成利;RNA干扰EGFR基因对骨肉瘤细胞影响的实验研究[D];南方医科大学;2007年

8 万宇;吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察[D];浙江大学;2007年

9 杨博;EGFR、TGF-α和PCNA在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义[D];郑州大学;2007年

10 王慧霞;EGFR及β-catenin在食管鳞癌组织中的表达及临床意义[D];郑州大学;2007年

  本文关键词：靶向表皮生长因子受体的肿瘤生物治疗方法研究进展，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：197064