斑翅果蝇非典型嗅觉受体Oreo的克

发布时间：2020-05-14 04:46

【摘要】：斑翅果蝇[Drosopphila suzukii(Matsumura,1931)]是一种广食性果实害虫,已知寄主遍及18个科60多种水果。其危害是雌虫将卵产于成熟和即将成熟的樱桃、蓝莓、草莓、柿子等软皮果实里,幼虫在果实内部取食,严重损害水果品质。斑翅果蝇生命活动中需要完成的觅食,求偶,产卵等行为均离不开嗅觉系统的参与,而Orco受体能将传统气味受体运送到嗅觉神经元树突膜的表面,并维持其构象稳定。研究斑翅果蝇Orco受体的表达方式和功能对从嗅觉系统发展新的害虫治理策略具有重要意义。本文运用PCR和RACE技术克隆了斑翅果蝇的Orco基因,并进行生物信息学分析;之后运用实时荧光定量PCR技术分析了斑翅果蝇各时期和不同组织的表达量;在此基础上运用RNA干扰技术鉴定了斑翅果蝇Orco基因的功能。主要研究结果如下:1.克隆得到的斑翅果蝇Orco基因mRNA序列长为1461 bp与NCBI(登录号:NM_001328601)查询到的基本一致,生物信息学分析结果显示该基因编码486个氨基酸,分子量大小为54271.14 Da,等电点为8.69;该蛋白亚细胞分布主要可能在内质网;有七段跨膜结构,该基因在氨基酸序列中不存在剪切位点;该蛋白属于疏水蛋白,但不属于分泌蛋白。蛋白保守结构域分析发现,斑翅果蝇Orco基因第70-476位氨基酸残基有一个Pfam 7tm_6的结构域;该蛋白质二级结构主要以α螺旋为主,主要由α螺旋和无规卷曲缠绕折叠形成三级结构。2.采用qPCR方法对斑翅果蝇成虫不同组织和不同发育时期进行表达量分析。结果显示,斑翅果蝇Orco在触角中大量表达,并且雄虫表达量高于雌虫;此外,在足、腹部和产卵器中Orco也有少量的表达。不同发育时期分析结果表明,斑翅果蝇Orco在卵、3龄幼虫、蛹和成虫中均有表达,但成虫期表达量要显著高于其他时期,是卵期表达量的12倍。3.采用显微注射法将dsRNA导入到羽化24 h后的斑翅果蝇腹部,干扰12 h、24 h和36 h后,用荧光定量PCR检测斑翅果蝇Orco表达情况。结果显示干扰12 h到24 h时,表达量发生显著性降低,说明dsRNA沉默了斑翅果蝇Orco基因的表达,此外,化学行为学实验也表明此时斑翅果蝇的寻找食物源的能力大大降低,说明对其搜寻寄主有影响,证明这个基因是与斑翅果蝇嗅觉相关的,沉默会损害斑翅果蝇的嗅觉能力。
【图文】：

１．８－２．０之间，ＯＤ邋２６０／２３０值在２．０－２．５之间，说明提取的ＲＮＡ纯度较高，仪逡逑器自动计算出ＲＮＡ浓度。取６队经糖凝胶电泳后，利用ＳｅｎｓｉＣａｐｔｕｅｒ软件对图逡逑像进行懫集分析。结果如图２－１：逡逑２０逡逑

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【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S433

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1 向候君;斑翅果蝇非典型嗅觉受体Oreo的克隆、表达与功能鉴定[D];福建农林大学;2018年

本文编号：2662813