黄瓜枯萎病生防放线菌的分离筛选及其发酵工艺研究

发布时间：2020-07-10 19:45

【摘要】：黄瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum,FOC)引起的世界范围内的土传病害,危害严重。生物防治是该病害的重要防治手段,本研究旨在寻找防治黄瓜枯萎病并促进植物生长的多功能生防放线菌。放线菌的分离和拮抗测定。本研究采用梯度稀释法,从包括21份蔬菜地土样、6份堆肥样品、5份蔬菜样品和7份药用植物样品共39份样品中分离到493株放线菌。通过平板对峙和挥发性物质抑菌实验,获得拮抗带大于18mm的拮抗菌株27株,其中菌株HNMH-3-1、HNSG-4-2和HS57对FOC菌落扩展的抑制率分别为79.2%,67.6%和52.4%。初步将该三株菌分别鉴定为S.parvus,S.nigrescens或S.lydicus和S.nigrescens或S.lydicus。拮抗放线菌的防病促生效果评价。温室实验表明,孢子浓度为1×10~7 CFU/mL的菌株HNSG-4-2、1×10~6 CFU/mL的菌株HNMH-3-1和1×10~7 CFU/mL的菌株HS57对黄瓜枯萎病防病效果较好,分别为97.9%、63.3%和51.0%。菌株HNSG-4-2和HNMH-3-1在孢子浓度为10~7CFU/mL时对苗的促生作用最好;与对照相比,菌株HNSG-4-2在孢子浓度为10~7 CFU/mL时使黄瓜茎粗、苗干重、根干重分别增加93.1%、102.0%、166.7%;菌株HNMH-3-1使黄瓜株高、苗干重和根干重分别增加了71.5%、41.8%和100.0%。拮抗放线菌HS57的发酵工艺研究。为实现大规模工业化生产目的,对菌株HS57液体发酵产孢培养基和发酵工艺进行研究。最适有机氮源、碳源、无机盐分别为豆粕粉、可溶性淀粉和MgSO_4?7H_2O。发酵液物料的粗细影响菌株HS57菌丝生长和产孢,850?m的细物料更有利于产孢。发酵结束时pH大于7.8,调酸后不能提高孢子存活能力;但发酵液离心后重悬于无菌水中,孢子存活量可达初始水平。将HS57发酵液离心重悬后,与硅藻土或硅藻土与稻壳粉混和物(体积比为2:1)吸附制成的固体菌剂对孢子存活无不利影响,孢子量为10~9 CFU/g。菌剂的干燥温度显著影响孢子存活,室温(20-24℃)干燥比40℃干燥处理的孢子存活量高。菌剂在4℃、室温(10-20℃)和26℃下贮存6个月的孢子存活量表明,4℃低温或室温更有利于孢子存活,6个月后活孢子量分别下降3倍和22倍,而26℃下保存的活孢子量下降52倍。综上所述,菌株HS57是一株具枯萎病菌拮抗性能、促生能力、适于大规模生产的高潜力生防菌株。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S436.421.13;S476
【图文】：

图 2.2 不同放线菌所产挥发性物质的抑菌作用Fig. 2.2 Antifungal activity of volatile compounds produced by actinomycetes表 2.4 不同放线菌产挥发性物质对病原菌菌丝生长的抑制作用Table 2.4 Suppression of volatile compound produced by different actinomycetes on FOC mycelial growth不同放线菌 菌落直径（mm） 抑制率（%） 不同放线菌 菌落直径（mm） 抑制率（%）

图 2.3 菌株 JCG-3-5ACC 脱氨酶基因序列验证Fig. 2.3 Agarose gel electrophoresis of the strain JCG-3-5 acdS sequence为 acdS 条带，CK 为无模板对照lane 16 was gene acdS of strain JCG-3-5, CK was double distilled water used as template.

图 2.4 不同放线菌菌株在刚果红培养基上产生的水解圈Fig. 2.4 Hydrolysis zone of cellulose by different actinomycetes strains on Congo red medium表 2.5 不同放线菌菌株产生的纤维素水解圈直径Table 2.5 The diameter of cellulose hydrolyzed zones by different actinomycetes strains菌株编号 水解圈直径(cm) D/d 值 菌株编号 水解圈直径(cm) D/d 值

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本文编号：2749370