热激蛋白70和一氧化氮合酶对松毛虫赤眼蜂滞育调控的初步研究
发布时间：2021-06-24 09:38
昆虫遇到不利自身发育条件时会表现出发育停滞的现象,研究称这种现象为滞育（diapause）。昆虫在各个时期均可以发生滞育,但是对某一种昆虫而言,发生滞育的时期通常是固定的。滞育状态下的昆虫表现出新陈代谢速率的大幅度降低及对外界环境抗性的显著提高,这两种变化导致了昆虫寿命的延长。人为的将滞育分为六个阶段。松毛虫赤眼蜂是一种重要的卵寄生蜂,对多种重要的鳞翅目害虫有较好的防控效果。而且在松毛虫赤眼蜂的工厂化生产中已经运用了滞育技术,但是对其滞育机制的研究却尚未见报道。本研究选取5个不同的发育阶段（滞育预蛹期;正在诱导解除滞育的预蛹期;经过滞育的蛹期;正常发育的预蛹期;正常发育的蛹期）,利用荧光定量,蛋白印迹等手段,分析热激蛋白70（HSP70）基因和一氧化氮合酶（NOS）基因的序列的特征并对其在不同发育阶段的表达量进行分析。研究结果如下:1.运用RACE技术克隆了HSP70的全长序列（Genbank登录号为MN709377）,长度为2,666 bp,其中,编码区长度为1,992 bp,5’非编码区（UTR）与3’非编码区（UTR）长度分别为49 bp和625 bp。HSP70基因编码区编码6...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
试验整体技术路线图
提取的总RNA电泳条带较为清晰,能看到3条较为明显的条带,分别为28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA,无明显的拖带现象,证明RNA未发生降解,具有完整性,可用于后续实验（图2.1）。A260/280值在1.9 ~ 2.1之间,浓度在594.555 ~ 941.903 ng/μl之间（表2-5）。表2-5 DeNovix分光光度计测定的RNA浓度和吸光值 Tab.2-5 The concentration and absorption of RNA as measured by DeNovix spectrophotometer 样品 Samples RNA浓度(ng/μl) A260/A280 A260/A230 Dpre 941.903 1.991 2.425 DT 923.124 1.895 2.373 Dp 594.555 1.976 2.409 NDpre 828.237 1.990 2.391 NDp 709.283 1.913 2.289
试验根据SMARTer? RACE 5"/3" Kit要求及步骤,提取松毛虫赤眼蜂总RNA,对HSP70进行3" RACE Outer Primer和5" RACE Outer Primer及特异性引物（HSP70gsp1,HSP70gsp2）设计,最终得到3"端片段长度为886 bp和5"端片段长度为407 bp（图2.2-A）。用DNAMAN V6软件将得到的3"端片段和5"端片段与中间片段进行拼接,获得一条长度为2,666 bp的松毛虫赤眼蜂HSP70 cDNA全长序列（图2.2-B）（Genbank登录号：MN709377）。其中包括1,992 bp的开放阅读框,3"端非编码区625 bp,5"端非编码区49 bp,AATAAA polyA加尾信号位于2,128 bp处。2.2.3 TdHSP70基因序列分析结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]稻螟赤眼蜂诱导滞育条件的优化[J]. 时亚东,田俊策,王国荣,鲁艳辉,郑许松,吕仲贤. 环境昆虫学报. 2020(01)
[2]大豆食心虫滞育与非滞育幼虫过冷却能力及其体内主要生化物质含量比较[J]. 李新畅,崔娟,唐佳威,夏婷婷,徐伟,史树森. 昆虫学报. 2019(09)
[3]诱导始期、温度和历期对松毛虫赤眼蜂滞育诱导及解除滞育的影响[J]. 张俊杰,张雪,杜文梅,阮长春,臧连生,任炳忠. 植物保护学报. 2018(06)
[4]家蚕中调控胚胎滞育的滞育激素及其受体研究概况[J]. 沈张飞,解鸿青,时连根. 昆虫学报. 2018(11)
[5]Limb symmetry index in competitive alpine ski racers:Reference values and injury risk identification according to age-related performance levels[J]. Lisa Steidl-Müller,Carolin Hildebrandt,Erich Müller,Christian Fink,Christian Raschner. Journal of Sport and Health Science. 2018(04)
[6]肽聚糖识别蛋白AaPGRP-LC参与埃及伊蚊的抗细菌免疫反应[J]. 杨青泰,赵莉蔺,邹振,王燕红,马瑞燕. 昆虫学报. 2018(01)
[7]我国赤眼蜂工厂化繁育技术改进及防治农业害虫应用现状[J]. 张俊杰,阮长春,臧连生,邵玺文,史树森. 中国生物防治学报. 2015(05)
[8]棉铃虫转录因子c-Myc基因在滞育和非滞育蛹脑中的表达分析及多克隆抗体制备[J]. 陈伟,徐卫华. 昆虫学报. 2015(02)
[9]一氧化氮（NO）作为信号分子在神经系统中的作用[J]. 林庆录. 中国地方病防治杂志. 2014(S2)
[10]家蚕滞育生物钟蛋白质EA4基因的cDNA克隆和序列分析[J]. 王玉军,徐世清,司马杨虎,吴阳春,刘莹,柳学广,丛海峰. 蚕业科学. 2007(01)
博士论文
[1]水稻二化螟赤眼蜂寄生效果评价及其滞育机制研究[D]. 张俊杰.东北师范大学 2015
硕士论文
[1]家蚕若干滞育关联基因蛹期表达分析及功能研究[D]. 蒋涛.江苏科技大学 2017
本文编号：3246852
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
试验整体技术路线图
提取的总RNA电泳条带较为清晰,能看到3条较为明显的条带,分别为28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA,无明显的拖带现象,证明RNA未发生降解,具有完整性,可用于后续实验（图2.1）。A260/280值在1.9 ~ 2.1之间,浓度在594.555 ~ 941.903 ng/μl之间（表2-5）。表2-5 DeNovix分光光度计测定的RNA浓度和吸光值 Tab.2-5 The concentration and absorption of RNA as measured by DeNovix spectrophotometer 样品 Samples RNA浓度(ng/μl) A260/A280 A260/A230 Dpre 941.903 1.991 2.425 DT 923.124 1.895 2.373 Dp 594.555 1.976 2.409 NDpre 828.237 1.990 2.391 NDp 709.283 1.913 2.289
试验根据SMARTer? RACE 5"/3" Kit要求及步骤,提取松毛虫赤眼蜂总RNA,对HSP70进行3" RACE Outer Primer和5" RACE Outer Primer及特异性引物（HSP70gsp1,HSP70gsp2）设计,最终得到3"端片段长度为886 bp和5"端片段长度为407 bp（图2.2-A）。用DNAMAN V6软件将得到的3"端片段和5"端片段与中间片段进行拼接,获得一条长度为2,666 bp的松毛虫赤眼蜂HSP70 cDNA全长序列（图2.2-B）（Genbank登录号：MN709377）。其中包括1,992 bp的开放阅读框,3"端非编码区625 bp,5"端非编码区49 bp,AATAAA polyA加尾信号位于2,128 bp处。2.2.3 TdHSP70基因序列分析结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]稻螟赤眼蜂诱导滞育条件的优化[J]. 时亚东,田俊策,王国荣,鲁艳辉,郑许松,吕仲贤. 环境昆虫学报. 2020(01)
[2]大豆食心虫滞育与非滞育幼虫过冷却能力及其体内主要生化物质含量比较[J]. 李新畅,崔娟,唐佳威,夏婷婷,徐伟,史树森. 昆虫学报. 2019(09)
[3]诱导始期、温度和历期对松毛虫赤眼蜂滞育诱导及解除滞育的影响[J]. 张俊杰,张雪,杜文梅,阮长春,臧连生,任炳忠. 植物保护学报. 2018(06)
[4]家蚕中调控胚胎滞育的滞育激素及其受体研究概况[J]. 沈张飞,解鸿青,时连根. 昆虫学报. 2018(11)
[5]Limb symmetry index in competitive alpine ski racers:Reference values and injury risk identification according to age-related performance levels[J]. Lisa Steidl-Müller,Carolin Hildebrandt,Erich Müller,Christian Fink,Christian Raschner. Journal of Sport and Health Science. 2018(04)
[6]肽聚糖识别蛋白AaPGRP-LC参与埃及伊蚊的抗细菌免疫反应[J]. 杨青泰,赵莉蔺,邹振,王燕红,马瑞燕. 昆虫学报. 2018(01)
[7]我国赤眼蜂工厂化繁育技术改进及防治农业害虫应用现状[J]. 张俊杰,阮长春,臧连生,邵玺文,史树森. 中国生物防治学报. 2015(05)
[8]棉铃虫转录因子c-Myc基因在滞育和非滞育蛹脑中的表达分析及多克隆抗体制备[J]. 陈伟,徐卫华. 昆虫学报. 2015(02)
[9]一氧化氮（NO）作为信号分子在神经系统中的作用[J]. 林庆录. 中国地方病防治杂志. 2014(S2)
[10]家蚕滞育生物钟蛋白质EA4基因的cDNA克隆和序列分析[J]. 王玉军,徐世清,司马杨虎,吴阳春,刘莹,柳学广,丛海峰. 蚕业科学. 2007(01)
博士论文
[1]水稻二化螟赤眼蜂寄生效果评价及其滞育机制研究[D]. 张俊杰.东北师范大学 2015
硕士论文
[1]家蚕若干滞育关联基因蛹期表达分析及功能研究[D]. 蒋涛.江苏科技大学 2017
本文编号：3246852
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