菜蛾盘绒茧蜂寄生小菜蛾对寄主海藻糖代谢的影响及其分子机制初探

发布时间：2022-05-02 22:28

　　海藻糖是昆虫血淋巴中最主要的糖类,在调控昆虫生殖、生长发育和能量代谢中发挥着重要的作用。菜蛾盘绒茧蜂C.vestalis寄生小菜蛾P.xylostella 后,寄主免疫能力下降,营养代谢紊乱,另外一个显著的变化就是血淋巴中糖含量的改变。所以,本文就菜蛾盘绒茧蜂调控寄主海藻糖的糖代谢及其相关分子机制展开研究。首先检测了菜蛾盘绒茧蜂寄生对小菜蛾血淋巴中海藻糖和葡萄糖含量的影响。然后克隆了小菜蛾海藻糖代谢通路上的6个酶的基因序列,通过定量PCR及RNAi发现了是通过升高合成关键基因的转录水平造成寄主寄生后海藻糖含量升高,酶活检测表明寄生并没有改变寄主海藻糖酶酶活。最后,用假寄生、显微注射寄生因子等试验证明了寄生早期的海藻糖含量升高是由于毒液发挥作用,且毒液通过提升PxHK的转录水平,从而发挥作用。现将研究结果总结如下:1.以3龄中（3rd-Ⅱ）为菜蛾盘绒茧蜂寄生的起始点,按发育阶段序列检测了寄生后,寄主发育至3龄末（3rd-Ⅲ）、4龄初（4th-Ⅰ）、4龄中（4th-Ⅱ）、4龄末（4th-Ⅲ）时,小菜蛾体内血淋巴中海藻糖及葡萄糖含量变化情况。结果表明当寄生后寄主发育至3龄末时,和未寄生的寄主... 

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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致谢
前言
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 昆虫体内的糖代谢概述
        1.1 海藻糖概述
        1.2 昆虫海藻糖代谢的研究进展
    2 生态因素对昆虫糖代谢的影响
    3 昆虫内源激素对糖代谢的影响
        3.1 胰岛素insulin对糖代谢的影响
        3.2 脂动激素AKH对糖代谢的影响
        3.3 保幼激素JH对糖代谢的影响
        3.4 蜕皮激素ecdysone对糖代谢的影响
    4 寄生对寄主糖代谢影响的研究概况
    5 RNAi在昆虫糖代谢研究中的应用
第二章 基本材料与方法
    1 基本实验材料
        1.1 养虫设备
        1.2 供试材料
    2 实验仪器及软件系统
        2.1 实验仪器
        2.2 软件系统
    3 常用实验试剂及配制
        3.1 试剂盒
        3.2 其它试剂
    4 常用试剂的配制
        4.1 磷酸缓冲液PBS
        4.2 感受态大肠杆菌的制备
        4.3 培养基的制备
        4.4 琼脂糖凝胶电泳相关试剂
    5 常规实验方法
        5.1 TRIzol法提取总RNA
        5.2 cDNA第一链的合成
        5.3 PCR反应
        5.4 琼脂糖凝胶电泳及凝胶回收目的片段
        5.5 连接反应
        5.6 转化
        5.7 质粒提取
        5.8 荧光定量PCR
第三章 菜蛾盘绒茧蜂寄生对小菜蛾血淋巴中糖含量的影响
    1. 材料与方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 实验方法
        1.3 小菜蛾血淋巴中糖类化合物含量分析
        1.4 数据分析
    2. 结果与分析
        2.1 海藻糖与葡萄糖标准曲线
        2.2 菜蛾盘绒茧蜂寄生对小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影响
        2.3 菜蛾盘绒茧蜂寄生对小菜蛾血淋巴中葡萄糖含量的影响
    3. 讨论
第四章 小菜蛾糖代谢相关基因的克隆与序列分析
    1 材料与方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 序列获得
        1.3 生物信息学分析
    2 结果与分析
        2.1 PxGP序列分析
        2.2 PxPGM序列分析
        2.3 PxTPS序列分析
        2.4 PxHK序列分析
        2.5 PxTRET1序列分析
        2.6 PxTRE-2序列分析
    3 讨论
第五章 寄生对小菜蛾海藻糖代谢相关基因转录的影响及PxTPS功能验证
    1 材料方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 实时荧光定量PCR检测
        1.3 小菜蛾海藻糖酶酶活测定
        1.4 双链合成
        1.5 dsRNA显微注射
        1.6 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 菜蛾盘绒茧蜂寄生对PxGP转录水平的影响
        2.2 菜蛾盘绒茧蜂寄生对PxPGM转录水平的影响
        2.3 菜蛾盘绒茧蜂寄生对PxHK转录水平的影响
        2.4 菜蛾盘绒茧蜂寄生对PxTPS转录水平的影响
        2.5 菜蛾盘绒茧蜂寄生对各组织PxTPS转录的影响
        2.6 菜蛾盘绒茧蜂寄生对PxTRET1转录水平的影响
        2.7 菜蛾盘绒茧蜂寄生对PxTRE-2基因转录水平的影响
        2.8 菜蛾盘绒茧蜂寄生对小菜蛾海藻糖酶酶活的影响
        2.9 PxTPS RNAi的效果
        2.10 PxTPS RNAi对小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影响
    3 讨论
第六章 寄生因子对小菜蛾血淋巴中海藻糖及PxHK转录水平的影响
    1 材料与方法
        1.1 供试昆虫
        1.2 实验方法
        1.3 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 菜蛾盘绒茧蜂假寄生对小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影响
        2.2 CvBV、菜蛾盘绒茧蜂毒液对小菜蛾血淋巴中海藻糖含量的影响
        2.3 菜蛾盘绒茧蜂毒液对PxHK转录水平含量的影响
    3 讨论
第七章 总讨论
    1 结论与讨论
    2 本文创新之处
    3 本文不足之处
    4 今后的研究方向
参考文献
附录
    教育经历
    硕士期间发表的文聿


【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫海藻糖及其合成酶基因的特性与功能研究进展[J]. 唐斌,徐青叶,赵丽娜,王世贵,张帆.  应用昆虫学报. 2014(06)
[2]寄生对越冬代菜粉蝶蛹血淋巴中蛋白质和糖类代谢的影响[J]. 吕慧平,蔡峻,叶恭银,徐红星,胡萃.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2000(06)



本文编号：3650080