丽蝇蛹集金小蜂两种唾液蛋白分子特性及功能分析

发布时间：2022-05-03 01:23

　　丽蝇蛹集金小蜂（Nasonia vitripennis）是重要卫生害虫蝇类的蛹期外寄生蜂,具有很高的特异性。其雌蜂将卵产在寄主蛹壳下,幼虫取食寄主获取营养。寄生蜂幼虫在取食过程中会分泌唾液帮助取食,以保证成功发育。丽蝇蛹集金小蜂染色体数目少,在室内一年四季均可繁殖,又比较容易饲养,所以是理想的模式昆虫之一。对其唾液在取食过程中发挥功能的研究不仅能为蝇类的防治开发新技术,提供新思路,还会为今后深入研究天敌昆虫唾液对寄主的影响机制提供很好的模型。本研究以丽蝇蛹集金小蜂和家蝇（Musca domestic）蛹为研究对象,对寄生蜂唾液中的两种蛋白进行分子特性分析及功能研究,主要研究内容及结果如下:1.幼虫唾液蛋白乙醇脱氢酶NvAdh功能相关分析根据丽蝇蛹集金小蜂的基因组序列设计引物,克隆获得了一个唾液蛋白乙醇脱氢酶基因的开放阅读框全长,将其命名为NvAdh（an alcohol dehydrogenase secreted by Nasoniavitripennis salivary gland）。该基因编码了 349个氨基酸序列,并且N端含有一段长为19个氨基酸残基的信号肽序列。通过qPCR... 

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．１信号肽预测图??Ｃ值：剪切位点值；Ｓ值：信号肽值；Ｙ值：综合Ｃ值和Ｓ值参数??

将ＮｖＡｄｈ的开放阅读框去除信号肽后，克隆到原核表达载体ｐＣｏｌｄ?Ｉ?ＤＮＡ??上，转化到原核表迗菌株ＢＬ２１?（ＤＥ３）中，对丽蝇蛹集金小蜂ＮｖＡｄｈ蛋白进行??原核表达。由图２．３可以看出，重组ＮｖＡｄｈ蛋白在大肠杆菌中成功表达，重组??蛋白的分子质量约为４０?ｋＤａ，与预测的分子大小（３７．８８?ｋＤａ）相符。之后对该??重组蛋白进行大量表达并制备抗体。??１２３４５６７８９?１０?Ｍ?ｋＤａ??－ｍ??一?一１００??ｍｔ?￣７０??—５５??？一３５??Ｉ！：??—１０??图２．３?ＮｖＡｄｈ蛋白原核表达??Ｆｉｇ?２．３?Ｐｒｏｃａｒｙｏｔｉｃ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＮｖＡｄｈ??１：未诱导ＧＦＰ菌体的上清；２：未诱导ＧＦＰ菌体的沉淀；３：诱导ＧＦＰ菌体的上清；４：??诱导

固定ＮｖＡｄｈ的酶浓度为０．８?ｍｇ／ｍＬ，在ｐＨ值为８．０的条件下，１２?￣?５２?°Ｃ??范围内，选取了?１２、１８、２７、３２、３７、４２、４７及５２°Ｃ八个温度进行试验，测得??乙醇脱氢酶ＮｖＡｄｈ的最适反应温度为３７?°Ｃ?（见图２．６），在１２?°Ｃ？３７?°Ｃ的范围??内，随着温度的逐渐升高，ＮｖＡｄｈ的活性也随之加强；在３７?°Ｃ？５２?°Ｃ的范围内，??随着温度的逐渐升高，ＮｖＡｄｈ的活性随之减弱。??？??４３??


本文编号：3650345