家蚕感染BmCPV过程中调控激素水平相关基因的研究

发布时间：2023-02-28 20:00

　　家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)是危害蚕业的主要病原之一,随着家蚕与病毒基因组序列相继测序完成,作为鳞翅目模式昆虫的家蚕,自然也成为研究昆虫与病原感染相互作用的生物模型。为了筛选抗BmCPV病毒的基因和蛋白,前期实验室通过数字基因表达谱(Digital gene expression profiling,DGE)和同位素标记相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)对家蚕中肠进行分析。结果发现多个激素相关的基因和蛋白在感染BmCPV后出现差异表达。20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)和保幼激素(Juvenile hormone,JH)是变态昆虫体内的两大激素,协同调控家蚕的蜕皮与变态。本论文研究激素与病毒之间是否存在互作关系及研究激素调控在家蚕抗病毒过程中发挥的免疫防御机制,主要从三方面展开:(1)家蚕感染BmCPV后血淋巴中激素滴度的测定;(2)筛选家蚕感染BmCPV后激素调控...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英文缩写说明
激素相关英文缩写说明
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 BmCPV
        1.1.2 BmCPV的侵染过程
        1.1.3 BmCPV的危害
        1.1.4 家蚕抗BmCPV的研究进展
    1.2 昆虫的免疫调控
        1.2.1 昆虫的先天免疫
        1.2.2 昆虫的激素调节
    1.3 昆虫激素在免疫中的研究进展
        1.3.1 昆虫激素在抗病原微生物中的研究
        1.3.2 昆虫激素在抗病毒中的研究
    1.4 研究目的及意义
    1.5 研究内容与技术路线
        1.5.1 主要研究内容
        1.5.2 实验技术路线
第2章 家蚕感染BmCPV后血淋巴中激素滴度的检测
    2.1 引言
    2.2 实验材料与试剂
        2.2.1 材料及试剂
        2.2.2 仪器及设备
        2.2.3 试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 家蚕品系及病毒接种
        2.3.2 实验材料的前期处理
        2.3.3 HPLC法测激素浓度
    2.4 结果与分析
        2.4.1 蜕皮激素含量测定
        2.4.2 保幼激素含量测定
    2.5 本章讨论
第3章 家蚕感染BmCPV后调控20E和 JH相关基因的筛选与鉴定
    3.1 引言
    3.2 实验材料与试剂
        3.2.1 材料与试剂
        3.2.2 仪器与设备
        3.2.3 试剂的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 病原接种与取材
        3.3.2 Trizol法提取总RNA
        3.3.3 反转录反应
        3.3.4 实时荧光定量PCR
    3.4 结果与分析
        3.4.1 家蚕染病情况确认
        3.4.2 RNA的提取及质量检测
        3.4.3 蜕皮激素相关基因的筛选与鉴定
        3.4.4 保幼激素相关基因的筛选与鉴定
    3.5 本章讨论
第4章 FAMeT-2 的鉴定与功能分析
    4.1 引言
    4.2 实验材料与试剂
        4.2.1 材料与试剂
        4.2.2 仪器与设备
        4.2.3 试剂的配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 FAMeT-2 基因的组织差异性表达
        4.3.2 FAMeT-2 基因生物信息学分析
        4.3.3 FAMeT-2 基因克隆与原核表达载体构建
        4.3.4 重组蛋白的表达与鉴定
        4.3.5 FAMeT-2的RNAi
        4.3.6 FAMeT-2 的过表达
    4.4 结果与分析
        4.4.1 FAMeT-2 基因的组织差异性表达
        4.4.2 FAMeT-2 基因的生物信息学分析
        4.4.3 FAMeT-2 基因克隆及原核表达载体构建
        4.4.4 FAMeT-2 蛋白的诱导表达与鉴定
        4.4.5 FAMeT-2的RNAi分析
        4.4.6 FAMeT-2 的过表达分析
    4.5 本章讨论
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学位论文
致谢



本文编号：3751747