【摘要】：野生稻是天然的基因宝库。在野生稻的研究中,大多研究人员都通过分子遗传学、细胞学或者生物信息学等方法探究野生稻的进化关系和与栽培稻的亲缘关系并挖掘野生稻的有利基因。本研究中,我们以不同组野生稻为供试材料,利用含有25000个寡核苷酸片段的日本晴第9号染色体探针库(oligo-chr9)和45SrDNA探针对不同来源的野生稻进行荧光原位杂交(FISH)分析,揭示了第9号染色体(chromosome 9,chr9)和45SrDNA在不同组野生稻之间的差异;同时我们还筛选到了能够鉴定CC组野生稻染色体的着丝粒探针和覆盖整个紧穗野生稻全基因组的SSR多态性分子标记,为野生稻种质资源的利用提供基础。具体研究结果如下:1、本研究利用oligo-chr9与45S rDNA探针对不同染色体组野生稻的根尖细胞进行FISH分析。研究结果表明斑点野生稻(YS7020,BB)染色体数为2n=24,oligo-chr9探针信号有2个,45S rDNA探针信号有4个,其中分布在chr9的1对信号较强,另1对信号较弱。小粒野生稻(YS7021,BBCC)染色体数目为2n=48,oligo-chr9探针信号有4个,45SrDNA探针有4个且都没有分布在chr9的端部位置;高杆野生稻(YS7035,CCDD)染色体2n=48条,oligo-chr9探针信号共有4个且信号基本覆盖整条染色体。45SrDNA探针信号共有8个,有4个信号分布于染色体的端部位置,其中有3个是分布于chr9上,1个信号是分布于非chr9上,另外的4个45S rDNA信号是分布于染色近着丝粒区;宽叶野生稻(YS7036,CCDD)染色体数为2n=48条,oligo-chr9探针信号共有4个,基本上覆盖了整条染色体,其中有2个信号较弱,45S rDNA探针信号共有14个,其中有6个信号分布于染色体近着丝粒区,有8个信号分布于染色体的端部,其中的4个信号分布于chr9染色体端部。另一个不同来源的宽叶野生稻(YS7037,CCDD)的oligo-chr9探针信号共4个,45S rDNA探针信号共8个,与YS7036存在差异。短花药野生稻(YS7040,FF)染色体数目2n=24条,oligo-chr9探针信号共2个,45SrDNA探针信号共2个,分布于chr9端部且信号较强。长护颖野生稻(YS7039,HHJJ)染色体数为2n=48条,oligo-chr9探针信号共4个,45S rDNA探针信号共8个,有2个信号分布于染色体近着丝粒区,2个信号分布于非chr9的端部,4个信号则分布于chr9端部。马来野生稻(YS7042,HHJJ)染色数为2n=48条,oligo-chr9探针信号共有4个,45SrDNA探针信号共有4个,都分布于chr9端部。2、本研究发现CC组根茎野生稻(YS7027)有2个oligo-chr9探针信号,45SrDNA信号有2个,其中1个信号分布于chr9端部,另1个则分布于非chr9端部。不同来源的紧穗野生稻与药用野生稻在45S rDNA和oligo-chr9探针信号上也存在着差异,我们对不同来源的紧穗野生稻和药用野生稻进行了基于oligo-chr9与45S rDNA探针FISH图像的染色体核型分析。研究结果显示紧穗野生稻(YS7024、YS7025、YS7026)在45S rDNA探针信号具有多态性,YS7024、YS7025和YS7026分别有5个、3个和2个信号,而且YS7026的一条chr9上没有45SrDNA信号分布;不同来源的药用野生稻(YS7029、YS7030、YS7032)在45S rDNA和oligo-chr9信号均存在差异,YS7030有4个oligo-chr9信号,其中的2个oligo-chr9信号分布于非chr9端部,2个oligo-chr9信号分布于第1对染色体的短臂的端部,而 YS7029 和 YS7032 只有 2 个 oligo-chr9 信号;在 YS7029 和 YS7030 均有 4 个 45S rDNA信号分布于染色体端部,而在YS7032中有一对45S rDNA信号分布于染色体近着丝粒区。3、本研究根据已公布的药用野生稻着丝粒区域的信息,设计5对引物,对紧穗野生稻、根茎野生稻、药用野生稻进行PCR扩增,以栽培稻02428作为对照,选择CC组野生稻中均有特异清晰目标条带的扩增产物并回收,重组到克隆载体后扩繁提取质粒,用缺口平移法标记质粒,获得CC组野生稻着丝粒的探针,即CentO-C。在紧穗野生稻、药用野生稻和根茎野生稻上进行FISH,结果显示每个细胞共有20个CentO-C信号,有2对染色体没有信号分布。结果表明CentO-C适用于CC组野生稻染色体的鉴定,为今后CC组野生稻与栽培稻杂交后代的检测提供了有用的工具。4、本研究在NCBI网站数据库查找到覆盖整个基因组的1200对SSR分子标记,并通过PCR筛选出紧穗野生稻与栽培稻02428的352对SSR多态分子标记,平均每条染色体含有29对分子标记并将其绘制成分子标记图谱。
【图文】：
扬州大学硕士学位论文０．５ｍＭ邋ｄＮＴＰ逦１０ｕｌ逡逑０．５ｍＭ邋ｄｉｇ－ｄＵＴＰ逦ｌＯｕｌ逡逑ＤＮＡ邋ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ逦２＿４ｕｌ逡逑ＤＮａｓｅ邋Ｉ逦４ｕｌ逡逑ｄｄＨ２0逦补足至邋ｌＯＯｕｌｍｉｎ，，然后加入１０ｕｌ０．２ＭＥＤＴＡ以终止片段ｌＯＯｂｐ左右大小。逡逑
图２．１单链寡核苷酸探针的制备逡逑２．２．４．１邋乳化邋ＰＣＲ逡逑
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S511.9
【参考文献】
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